203983. lajstromszámú szabadalom • Eljárás baromfipestis elleni élő vakcina előállítására
1 HU 203 983 B 2 A találmány szerinti eljárásban alkalmazott NDV- 6/10 jelű törzs kiválasztásánál figyelembe vettük azt, hogy a vírustörzs rendelkezzen az aeroszolos immunizáláshoz szükséges alábbi előnyős tulajdonságokkal: a jó teijedóképesség és alacsony pathogenitás kombinálódása, valamint az utóbbival korrelációban lévő in vitro jegy. Az ismert NDV-6 törzs (190 620 ljsz. magyar szabadalmi leírás) részletesebb vizsgálatakor kiderült, hogy különböző tulajdonságú szubpopulációkból áll. Plakkozással kiválasztott egyik szubpopulációja in vitro körülmények között minőségi eltérést mutatott a többi avirulens törzsre jellemző viselkedéstől: csirkeembrióból készült hámszerű (epitel) tenyészetek (vese, tüdő) fertőzése után nem az avirulens törzsekre is jellemző óriássejtek képződtek, hanem csak sejtlekerekedés lépett fel. Ezen alacsonyabb pathogenitásra utaló in vitro jegy az egyik szempont, ami miatt a szubpopuláció élő vakcinaként való alkalmazása felmerült. Itatással való kipróbálásakor azonban kiderült, hogy teijedőképessége túl alacsony: az állatok egy része következetesen nem hangolódott át. Ekkor ezt a változatot tízszer passzáltuk át növendék csirkéken úgy, hogy a szájon át felvett vírust a kloákából izoláltuk vissza, majd ezzel ismét szájon át fertőztünk. A bélhámhoz történő adaptálás után nőtt az áthangolódási arány, de nem emelkedett a finom aeroszollal kiváltható stressz, mert légzőszervi tünetek így sem mutatkoztak. Az NDV-6/10 törzs tehát az NDV-6 törzs olyan szubpopulációja, amely a szülőnél és más avirulens törzseknél in vitro próbában azokhoz képest további gyengítés jeleit mutatja (sejtlekerekedés embrió epitel tenyészetben); csirkebélhámhoz való fokozott adaptációja miatt a szülőnél jobb terjedőképességgel rendelkezik. A találmány szerinti eljárással előállított élő vakcina kiindulóanyagaként alkalmazott NDV-6/10 jelű törzset NCAIM V (P) 001075 számon 1988. december 1-jén letétbe helyeztük a Mezőgazdasági és Ipari Mikroorganizmusok Nemzetközi Gyűjteményénél (Budapest). A találmány szerinti eljárásban alkalmazott NDV- 6/10 törzs előnyei a következők: 1. Kb. 100 EID50 (embrió infektív dózis 50%-a) vírus 5 napon belül nem pusztítja el allantois üregbe oltva a 10 napos csirkeembriót. 2.107 EID50 vímsadaggal agyvelőbe oltott egynapos csirkék (vizsgálatonként legalább 10 csirke) teljesen egészségesek maradnak és normálisan fejlődnek. 3. Bármely kori) csirke, még frissen kelt is, bármilyen oltás utána (vírusköddel, a szemkötőhártyára vagy ormyálkahártyára cseppentéssel) tünetmentesen viseli el az immunizáló adag 100-szorosát is. 4. Az NDV-6/10 immunizáló dózisa vírusködben (aeroszolban) alkalmazva 107-3 EID50/m3, ami gazdaságosságát tekintve nem marad el a régi vakcinatörzsekétől. 5. Rendkívül hőstabil, így a csirkéknek szánt vírusmennyiség nem csökken a vakcinálás során (ivóvízben vagy ködben alkalmazva). De a régi vakcinákénál kisebb a vírusveszteség már a vírustermeléskor, kiszereléskor (liofilizáláskor) és tárolás alatt is. 6. Viszonylag alacsonyabb haemagglutináció gátlás (HÁG) vérsavó értékekhez legalább ugyanolyan védettség (immunitás) tartozik, mint a régi vakcinák esetében. Az alacsonyabb vérsavó HAG-értékek előnye, hogy biztosabban elkülöníthetők a csak vakcináit állatok (állományok) azoktól, amelyek vakcinálás után még vadvínissal is megfertőződtek, de nem betegedtek meg, mert utóbbiakban a HAG-értékek gyorsan emelkednek. 7. Mérsékelt légzőszervi reakciót vált ki. Ennek veszélyét azáltal is csökkentettük, hogy az NDV-6/10 törzset részben bélhámsejtekhez adaptáltuk. 8. Igen nagy specifitású immunológiai reagenssel (monoklonális ellenanyagokkal) és igen érzékeny immunológiai próbával (ELISA-val) az NDV-6/10 minden más irodalomból ismert avirulens (lentogen) NDV törzstől megkülönböztethető, beleértve a régi vakcina törzseket (LaSota és B—1) is, sőt az NDV-6/10 egyedileg felismerhető. Ezzel az eszközzel könnyen tisztázható, hogy bármilyen légzőszervi állapotból izolált avirulens vírustörzs megegyezik-e az NDV-6/10 vakcinatörzzsel, vagy sem. Egy vakcínatörzs egyedi felismerhetősége egy modem vakcinánál alapkövetelménynek tekinthető. Az NDV-6/10 az első olyan baromfipestis elleni vakcina? törzs, amely ennek a kívánalomnak eleget tesz. w Az NDV-6/10 törzs a fenti tulajdonságai alapján többféle formában alkalmas baromfipestis elleni im^ munizálásra. A találmány szerinti eljárással előállított vakcina adagolása történhet aeroszolos módon, vírusköd formájában, ivóvízben, a kötőhártyára vagy az ormyílásba cseppentve. A baromfiállomány első immunizálása történhet napos-néhány hetes korban, a növendék és a felnőtt állatok tartós védettsége ismételt immunizálással biztosítható. A védettség időtartama ismételt immunizálással jelentősen megnyújtható, és így a baromfiállományban a teljes életkorra kialakítható a baromfipestis elleni védettség, csupán az NDV-6/10 jelű törzs alkalmazásával is. A találmány szerinti eljárással előállított élő vakcina alkalmas kombinációkban való felhasználásra is. Az NDV-6/10 vakcinával immunizálhatok a fiatal és növendék állományok akkor is, ha azokat a tojószezon előtt inaktivált, esetleg társított vakcinával kívánják immunizálni. A baromfipestis elleni inaktivált vakcina jó booster-hatását az NDV-6/10 vakcina ugyanis biztosítja. A találmány szerinti eljárással előállított vakcina akkor is megfelelő védettséget ad, ha a vele immunizált állományokban más (pl. Marek-féle betegség, fertőző bronchitis, Gumboroi betegség elleni) vakcinákat is alkalmazunk, akár egidejűleg vagy rövid időn belül. A baromfipestis vírusa jó interferon-indukáló hatású. így interferon-termelésre vagy azzal azonos hatás kiváltására az NDV-6/10 törzs is alkalmazható, annál is inkább, mivel ez a törzs teljesen ártalmatlan. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
