203971. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3'-azido-3'-dezoxitimidint és egy további hatóanyagot tartalmazó szinergetikus kombinációs gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 203 971 A 2 /. táblázat A betegek sor-AUC c '-max c mm ^ max Clteli„/F Felezési idő száma (U.mól) ((linót) (óra Uniót) (óra) (ml/perc/70 kg) (óra) 1. AZT/PB 10,41 6,13 0,15 0,25 829,50 1,84 2. AZT/PB 10,00 6,46 0,27 0,50 921,00 1,61 Átlag 10,21 6,30 0,21 0,38 875,25 1,73 ±SD 0,29 0,23 0,08 0,18 64,70 0,16 1. AZT 3,70 3,74 0,00 0,50 2333,80 0,87 2. AZT 3,04 2,51 0,00 0,31 3027,00 0,89 Átlag 3,37 3,13 0,00 0,41 2680,40 0,88 ±SD 0,47 0,87 0,00 0,13 480,17 0,01 2. vizsgálati példa Vírusellenes aktivitás A II. táblázatban 3'-azido-3'-dezoxitimidin (AZT) Friend leukémia vírus (FLV) ellen kifejtett hatásának fokozódását mutatjuk be nukleozid transzport inhibitorok, így dipiridamol, dilazep és 6-[(4-nitro-benzil)-tio]- 9-ß-ribofuranozil)-purin hatására. FG-10 sejteket szélesztünk lemezen, majd 24 óra múlva FLV-sal fertőzzük. A befertőzést követően 1 óra múlva hozzáadjuk a 25 vizsgálandó vegyületeket vagy kombinációkat ismert koncentrációban. A lemezeket 3 napig inkubáljuk, a tápközeget friss McCoy 5A tápközeggel helyettesítjük, és az inkubálást 3 napig folytatjuk. AII. táblázatban a vizsgálandó vegyületeknek, illetve kombinációknak 30 azt a koncentrációját adjuk meg, amelyik a plak képződést 50%-ban gátolja. Sem a dipiridamol (10 umól/l-es koncentrációban), sem a dilazep (5 pmól/l-es koncentrációban) önmagában nem fejt ki megfigyelhető vírusellenes hatást. II. táblázat Vegyület/készítmény Azidotimidin ED50 (nmól/1) AZT 5 AZT + 1 jumól/1 dipiridamol 1 AZT + 5 umól/1 dipiridamol 0,5 AZT +10 umól/1 dipiridamol 0,2 AZT + 5 umól/1 dilazep 0,5 AZT + 5 p/1 6-[(4-nitro-benzil)-tio]-9-B-D-ribofuranozil-3 purin 3. vizsgálati példa AZTIacyclovir kombináció in vitro alkalmazása HIV-sal szemben AZT és acyclovir (ACV) kombinációk in vitro hatását vizsgáltuk HIV-sal szemben. Az ACV önmagában alacsony aktivitást mutatott, a legmagasabb vizsgált koncentrációban, 16 .ug/ml koncentrációban, 30%-nál kisebb védelmet biztosított, míg az AZT 8 umól/1 koncentrációban 100%-os védelmet nyújt. AIII. táblázatban a két gyógyszernek azokat a kom- 20 binációit tüntetjük fel, amelyekben 100%-os védelmet nyújtanak. Az eredmények azt mutatják, hogy az ACV körülbelül háromszorosan szinergizálja az AZT vírusellenes aktivitását. III. táblázat ACV ( Ug/ml) AZT (pmól/1)-0 8 0,5 2 1 1 4 0 8 4. Vizsgálati példa AZT!interferon kombinációk in vitro alkalmazása HIV-sal szemben Egészséges, HÍV szeronegatív, önkéntes donorok 40 heparinezett véréből Ficoll-Hypaque ülepítéssel nyert perifériás vér egymagvú sejteket (PBMC) alkalmazunk. A sejteket 10 ug/ml fitohemagglutininnel (HPA) kezeljük, és 20% magzati borjúszémmmal (FCS), antibiotikumokkal, 1-glutaminnal és 10% interleukin-2-vel 45 (IL-2), (Electronucleonics, Bethesda, MD) kiegészített R PMI 1640 tápközegben tenyésztjük. A PHA-nel történt kezelés után 4-6 nap múlva a sejteket 5 ml tápközeget tartalmazó 25 ml-es lombikban 4xl03 * 5 sejt/ml koncentrációban szuszpendáljuk, és az alábbiakban is- 50 mertetendő gyógyszereknek és vímsnak tesszük ki. A vímssal történő befertőzés napját jelöljük 0. napként. A 4. napon friss tápközeget adagolunk. Ezt követően minden 3-4. napon a sejtszuszpenzió egy részét elemzésre kivesszük, és friss, sejtmentes tápközeggel he- 55 lyettesítjiik. A 2. és 4. kísérletet 14 nap után fejezzük be, az 1. és a 3. kísérletet 16 napig folytatjuk. A vínis-tenyészetek HIV-sal fertőzött H9 sejtek sejtmentes föliilúszójának -70 °C hőmérsékleten fagyasztott alikvot részei. A vírustenyészet 50%-os szövette- 60 nyészet fertőző dózisa (TCID50) 105/ml. 8
