203888. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pirazolo-piridin-gyűrűt tartalmazó mevalonsavszármazékok és ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 203 888 B 2 A találmány szerint előállított vegyület jelzőszáma Relatív aktivitás 1-5-11 58,8 1-5-12 47,3 1-5-13 55,5 1-5-16 49,0 1-5-17 36,0 A „C” vizsgálattal megállapított inhibitor-aktivitási értékek: Szájon keresztül 0,2 mg/kg dózisban adtuk be az 1-5-4, az 1-5-5 és az 1-5-7 jelzőszámú vegyületeket, majd a kontrollcsoportnál mért értékhez viszonyítva mértük a beütések számának százalékos csökkenését, amely a vegyületek nevének említése sorrendjében 53%-os, 49%-os és 52%-os volt. A beütések száma abban az esetben, amikor ugyanilyen körülmények közötti orális adagolással 0,2 mg/kg dózisban (CS-514)et juttattunk be a patkányokba, 39%-os volt A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek gátlóhatása tehát az „A”, 3" és „C” vizsgálatok során nagyobbnak bizonyult, mint a referenciavegyületként alkalmazott CS-514-é. „D” vizsgálat: Az akut toxicitás meghatározása A vizsgálat tárgyát képező vegyület 0,5%-os CMC- szuszpenzióját szájon keresztül beadtuk egy három ICR hím egérből álló csoport egereinek. Az akut toxicitást 7 nap után a mortalitás alapján határoztuk meg. Az 1-5-1, az 1-5-2, az 1-5-4, az 1-5-7, az 1-5-10, az 1-5-11, az 1-5-12, az 1-5-14 és 1-5-15 számjelzésí vegyületek esetében a mortalitás 0%-os volt még akkor is, amikor ezeket a vegyületeket egyenként 1000 mg/kg dózisban alkalmaztuk szájon keresztül. 1 1. példa Etil-(E)-7-{4 ’ ■(4” -fluor-fenil)-! ’ 3 ’ -.dimetil-6’ -metil-etil)-pirazolo[3,4-b]piridin-5'-il}-3 ő-dihidroxi-hept-6-enoát - (1-1-1) számjelzésű vegyület - előállítása Ezt a vegyületet az 1/a-g reakciólépésekből álló szintézissel állítjuk elő. Ha lépés: Etil-4-(4' -fluor-fenil)-l 3-dimetil-6-(l' - -metil-etil)-pirazolo[3,4-b]piridin-5-il-karboxilát(VII-1) vegyület - előállítása A dihidroszármazék előállítása: 2,22 g (0,02 mól) 5-amino-l,3-dimetil-pirazolt öszszekevertünk 5,3 g (0,02 mól) 2-(4’-fluor-benzilidén)-4-metil-3-oxo-pentánsav-etil-észterrel és az így kapott elegyet egy óra hosszat mintegy 130 *C-os hőmérsékleten tartottuk. Egy forgóbepárolóban vákuum alkalmazása mellett kidesztilláltuk a reakcióelegyből az alacsony forráspontú komponenseket Ezt követően a reakcióelegyet feloldottuk kloroformban, először vizes nátrium-karbonát-oldattal, majd vízzel mostuk az oldatot, majd vízmentes magnézium-szulfáton szárítottuk. A kloroformot elpárologtattuk és a visszamaradó olajszerű anyagot szilikagéllel töltött oszlopon kromatografálva tisztítottuk. Ilyen módon dihidropirazolo[3,4- b]piridint (XI—1) állítottunk elő. PNMR (CDCI3) 8 ppm: 0. 81.(d, J-7 Hz, 3H), 1,0-1,3 (m, 6H), 1,97 (s, 3H), 2,64 (m, 1H), 3,44 (d, J-3 Hz, 1H), 3,81 (s. 3H), 4,06 (q, J-7 Hz, 2H), 4,48 (d, J-3 Hz, 1H), 6,84 (m, 4H) 1. oxidációs módszer Az előző lépésből előállított dihidrovegyületből feloldottunk 7,54 g-ot 15 ml jégecetben, majd a keletkezett oldathoz hozzáadtunk 2,2 g króm-trioxidot A reakcióelegyet szobahőmérsékleten - 15-20 *C-on - kevertettük. Miután vékonyréteg-kromatográfiás méréssel meggyőződtünk a kiindulási anyag eltűnéséről, 100 ml vizet adtunk a reakcióelegyhez, amelyet ezt követően klőroformmal extraháltunk. Akloroformos réteget összeráztuk telített, vizes nátrium-karbonát-oldattal és vízzel, majd vízmentes magnézium-szulfáton szárítottuk. A kloroformot kidesztilláltuk a reakcióelegyből. A maradék, olajszerű anyagot szilikagéllel töltött oszlopon kromatografálva tisztítottuk - eluálószerként metanol és kloroform elegyét használtuk - és ilyen módon fehér kristályok formájában kaptuk meg a kívánt vegyületet. Olvadáspont 60-64 *C, hozam: 52% (az amino-pirazol mennyiségére számítva). 2. oxidációs módszer Az előző lépésben előállított dihidroszármazékból 1 g-ot feloldunk kis mennyiségi! etanolt tartalmazó acetonban, majd a keletkezett oldathoz 1,5 mólekvivalens kálium-permanganátot adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten keverjük egy napon keresztül. Vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel meggyőződünk arról, hogy a reakcióelegyben már nem található reakcióba nem lépett dihidroszármazék, majd a mangán-dioxidot eltávolítjuk szűréssel. A szűrletet bepároljuk, és a visszamaradt olajszerű anyagot ugyanolyan módon kezeljük, ahogy az előző, 1. oxidációs módszeméi, hogy megkapjuk a kívánt vegyületet Hozam: 60%-os (az amino-pirazolra számolva). llb lépés: 4-(4' -fluor-fenil)-5-(hidroxi-metil)-1J--dimetil-6-(l’-metil-etil)-pirazolo[3,4-b]piridin - a (VI-1) számjelzésű vegyület - előállítása A (VII-1) vegyületből 5,0 g-ot (0,014 mólt) nitrogénatmoszférában feloldunk száraz toluolban, majd az oldatot jeges fürdőben 0 *C-ra hűtjük. Ehhez az oldathoz hozzáadunk cseppenként 35 ml 16 t%-os toluolos diizobutil-alumínium-hidridet, majd az elegyet 0 *C-on kevertetjük 2 óra hosszat. Meggyőződünk a (VII—1) vegyület teljes eltűnéséről vékonyréteg-kromatográfiás módszerrel, majd a reakcióelegyhez hozzáadunk 0 ”C- on telített, vizes ammónium-klorid-oldatot a reakció megállítása érdekében. A kapott reakcióelegyhez hozzáadunk dietil-étert és a szerves fázist elkülönítjük. A zselatinálódott anyagot feloldjuk vizes nátrium- hidroxid-oldat hozzáadásával, majd ismételt extrahálást haj-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 9
