203784. lajstromszámú szabadalom • Eljárás eglin és eglinszármazékok, és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint tesztkit eglin meghatározására
1 HU 203 784 B 2 szerint súlyos tüdőobstrukció és emfizéma mutatkozott. Ezzel ellentétben az N-acetil-eglin-C-vel kezelt mindegyik állat normális légzésfunkciót mutatott A tudó hisztológiai vizsgálata a kisdózisú csoport (0,5 mg N°-acetil-eglin-C) 8 állata közül csupán kettőnél mutatott ki kismértékű, lokális emfizémás elváltozásokat; a többi állaton nem mutatkozott elváltozás, ami az intratracheálisan adagolt N°-acetil-eglin-C védőhatását és egyidejűleg annak kis toxicitását bizonyítja. A találmány szerinti új eglinszármazékokat, különösen az Na-acetil-eglin-származékokat, ennek megfelelően tüdőbetegségek, például leukocita-elasztázzal előidézett tüdőbetegségek, így emfizéma és ARDS („acute respiratory distress syndrome”), mucoviscidosis profilaktikus és terápiás kezelésére, továbbá szeptikus sokk esetében gyulladást csökkentő szerként és gyulladást gátló szericént alkalmazhatjuk. A találmány táigya hasonlóképpen a találmány szerinti új eglinszármazékok és farmakológiailag elviselhető sóik profilaktikus és terápis kezelésnél való alkalmazása az említett kórképek esetében. A találmány tárgya hasonlóképpen olyan gyógyszerkészítmény , amely legalább egy találmány szerinti vegyületet vagy annak farmakológiailag elfogadható sóját tartalmazza, adott esetben valamilyen farmakológiailag elfogadható hordozóval és/vagy segédanyagokkal együtt Ezeket a gyógyszerkészítményeket különösen a fenti indikációkban alkalmazhatjuk, ha azokat például parenterálisan (így intravénásán vagy intrapulmonálisan) vagy helyileg adagoljuk. Az adagolás elsősorban a specifikus feldolgozási formától és a terápia, ill, profilaxis céljától függ. Az adagolás intravénás injekcióban vagy intrapulmonálisan, inhalációval, például Bitd-készülékkel történik. Ennek megfelelően a parenterális adagolású gyógyszerkészítmények egységdózis formája az alkalmazás módjától függően 10-50 mg találmány szerinti vegyületet tartalmaz dózisonként. A gyógyszerkészítmények a hatóanyag mellett az izotónia beállításához szokásos módon még nátrium-kloridot, mannitot vagy szorbitot tartalmaznak. Liofilizált vagy oldott formájúak lehetnek, mimellett az oldatok előnyösen antibakteriális hatású konzerválószert, például 0,2-0,3% 4-hidroxi-benzoesav-metil- észtert vagy -etil-észtert tartalmazhatnak. A helyi alkalmazású készítmény lehet vizes oldat, borogatóvíz vagy zselé, olajos oldat vagy szuszpenzió, vagy zsírtartalmú, vagy különösen emulziós kenőcs. A készítményt vizes oldat formájában, például úgy kapjuk, hogy a találmány szerinti hatóanyagot vagy annak farmakológiailag elfogadható sóját 4-7,5 pH-jú vizes pufferoldatban oldjuk és kívánt esetben további hatóanyagot, például gyulladásgátlót és/vagy polimer kötőanyagot, például polivinilpirrolidont és/vagy konzerválószert adunk hozzá. Helyi adagolásra alkalmas olajos készítményt, például úgy állítunk elő, hogy a találmány szerinti vegyületet vagy annak farmakológiailag elfogadható sóját olajban szuszpendáljuk, adott esetben duzzasztószerek, 18 így alumínium-sztearát, és/vagy felületaktív szerek (tenzidek), amelyek HLB-értéke („hydrophilic-lipophilic-balance”) 10 alatt van, így többértékű alkoholok zsírsav-monoésztereinek, például glicerin-monosztearát, szorbitan-monolaurát, szorbitan-monosztearát vagy szorbitan- monooleát A zsírtartalmú kenőcsöt például a találmány szerinti hatóanyagok vagy farmakológiailag elfogadható sóik kenhető zsíralapban való szuszpendálásával állítjuk elő, adott esetben 10-nél kisebb HLB-értékű tenzid hozzáadása közben. Emulziós kenőcsőt a találmány szerinti hatóanyagok vagy sóik vizes oldatának lágy, kenhető zsíralapban való eldörzsölésével kapunk 10-nél kisebb HLB-értékű tenzid hozzáadása közben. Mindezek a helyi alkalmazási formák konzerválószert is tartalmazhatnak. A hatóanyag koncentrációja 0,1-5 mg, előnyösen 0,25-1,0 mg, körülbelül 10 g alapmasszában. Intrapulmonális adagolás útján a légutak kezelésére alkalmas inhalációs készítmény, például az aeroszol vagy spray, amely a gyógyszerhatóanyagot oldat vagy szuszpenzió formájában képes szétoszlatni. A gyógyszerhatóanyagot oldat formájában tartalmazó készítmények ezenkívül alkalmas hajtógázt, továbbá, ha szükséges kiegészítő oldószert és/vagy stabilizátort tartalmaznak. A hajtógáz helyett sűrített levegőt is alkalmazhatunk, mimellett ezt alkalmas sűrítő- és expandálókészülék segítségével igény szerint állíthatjuk elő. Különösen alkalmas adagolásra a Bird-respirátor, amely az orvostudományban bevezetett és ismert; ennél a hatóanyag oldatát a készülékbe adjuk, kis túlnyomáson köddé porlasztjuk és a lélegeztetett páciens tüdejébe juttatjuk. A kortól, egyéni állapottól és a betegség fajtájától függően kb. 70 kg súlyú melegvénínek (ember vagy állat) intrapulmonális adagolás esetében egy inhaláció alkalmával 10-30 mg-ot (napota egyszer-kétszer) és intravénás adagolás esetében, például tartós infúzióval naponta 10-1000 mg-ot adagolunk. Az immunológiai eljárással, például ELISA-val meghatározható terápiás hatású köpet- és plazmakoncentrációk 10 és 100 (Jg/ml (kb. 1-10 pmól/1) között találhatók. A találmány különösen a példákban leírt eglint vagy módosított eglint kódoló DNS-szekvenciákra, ilyen DNS-szekvenciákat tartalmazó expressziós plazmidokra, ilyen expressziós plazmidokkal transzformált mikroorganizmusokra, eglin elleni monoklonális antitestekre, ilyen antitesteket termelő hibridomasejtekre, és ilyen antitesteket tartalmazó immunassay tesztkitekre, ezeknek a példákban leírt előállítási eljárására és a példákban az eglinszármazékok transzformált mikroorganizmusok segítségével történő előállítási eljárására, valamint a példákban említett új eglinszármazékokra vonatkozik. A találmány néhány kiviteli formáját, amit a következő kísérleti részben írtunk le, kísérő rajzok segítségével szemléltetjük. Az 1. ábra az eglin-C-gén Fi(C) és F2 ffagmentjeinek szintézisét ábrázolja vázlatosan. A 2. ábra az eglin-C-gén Fi(C) ffagmentjét klónozó vektor, a pML87 plazmid előállítását mutatja. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
