203784. lajstromszámú szabadalom • Eljárás eglin és eglinszármazékok, és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint tesztkit eglin meghatározására
1 HU 203 784 B 2 a képletben B jelentése kovalens kötés vagy a természetes eglinek N-terminálisától számított 1-10 aminosavat tartalmazó peptidcsoport, például a SerPhe-, LeuLysSerPhe-, SerGluLeuLysSerPhe-, PheGlySerGlu- LeuLysSerPhe- vagy ThirGluPheGlySerGluLeuLys- 5 SerPhe-csoportok közül választott, és B’ jelentése semmi vagy a természetes eglinek C-tenninálisától számított 1-6 aminosavat tartalmazó peptidcsoport, például a- HisVal-, -HisValProHis- vagy -HisValProHisValGlycsoportból választott, W jelentése Tyr vagy His, és r 10 jelentése 0 vagy 1, mimellett azokban a (XIV) általános képletií vegyöletekben, ahol a képletben r jelentése 0, az N-terminális aminosav adott esetben N-acetilezett- és ezek sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely expressziós plazmiddal - ami valamely exp- 15 ressziós kontrollszekvencia által szabályozott eglint kódoló DNS- szekvenciát tartalmaz - transzformált gazdát valamilyen asszimilálható szén- és nitrogénforrást tartalmazó folyékony tápközegben tenyésztünk és a terméket a gazdasejtekből szabaddá tesszük és izoláljuk, vagy a (XIV) általános képletül származékok - a képletben r jelentése 0 és az N-terminális aminosav N-acetilezett - előállítására oly módon, hogy a (XTV) általános képletií, az N-terminálison szabad aminocsoportot tartalmázó vegyületet acilezzük, és kívánt esetben a kapott (XTV) általános képlett! eglinszármazékokat másik (XTV) általános képied! eglinszármazékká alakítjuk, és ha szükséges az eljárás szerint kapott (XIV) általános képlett! vegyületek keverékét szétválasztjuk az egyes komponensekre, és/vagy kívánt esetben a kapott sót szabad polipeptiddé és a kapott polipeptidet annak sójává alakítjuk. A találmány előnyös eljárás a (XIV’) általános képlett! eglinszármazékok -VGluPheGlySerGluLeuLysSerPheProGluValValGlyLysThrValSapGlnAlaArgGlu 'iyrPheThrLeuHisiyrProGlnTyrAspValWPheLeuProGluGlySerProValThrLeuAsp LeuArgTyrAsnArgValArgValPheTyrAsnProGlyThrAsnValValAsnHisValProHis ValGly (XT/’) a képletben V jelentése Thr, N-acetil-Thr vagy Met- 25 Thr és W jelentése Tyr vagy His - és sóik előállítására azzal jellemezve, hogy valamely expressziós plazmiddal - amely valamely expressziós kontrollszekvencia által szabályozott eglint kódoló DNS-szekvenciát tartalmaz - transzformált gazdát valamilyen asszimilálha- 30 tó szén- és nitrogénforrást tartalmazó, folyékony tápközegben tenyésztünk és a mikroorganizmussejtekből az eglint szabaddá tesszük és izoláljuk, és kívánt esetben a kapott eglint - ahol a képletben V jelentése N-acetil-Thr vagy Met-Thr és W jelentése a fenti - 35 eglinné - a képletben V jelentése Thr - alakítjuk, és ha szükséges, az eljárás szerint kapott (XIV’) általános képlett! vegyületek keverékét az egyes komponensekre szétválasztjuk, és/vagy kívánt esetben a kapott sót szabad polipeptiddé és a kapott polipeptidet annak sójává 40 alakítjuk. A találmány eljárás különösen (XIV) általános képlett! eglin-C-származékok - a képletben B jelentése a LeuLysSerPhe-, SerGluLeuLysSerPhe- vagy ThrGluP- heGlySerGluLeuLysSerPhe-csoportból az egyik pép- 45 tidcsoport és B’ jelentése a -HisValProHisValGly-csoport, W jelentése a -HisValProHisValGly-csoport, W jelentése Tyr és r jelentése 0 vagy 1 egész szám - továbbá eljárás a (JGV) általános képlett! eglin-B-származékok - a képletben B jelentése a ThrGluPheGly- 50 SerGluLeuLysSerPhe-peptidcsoport és B’ jelentése a -HisValProHisValGly-peptidcsoport, W jelentése His és r jelentése a 0 vagy 1 egész szám, mimellett azokban a (XIV) általános képlett! vegyületekben, ahol a képletben r jelentése 0, az N-terminális aminosav adott eset- 55 ben N-acilezett - és sóik előállítására. A (XTV) általános képlett! vegyületekben W előnyös jelentése Tyr (eglin-C-vegyületek). A találmány elsősorban eljárás (XTV) általános képiéül eglin-C-vegyületek - a képletben B jelentése N- 60 acetil-SerGluLeuLysSerPhe-, ThrGluPheGlySerGlu- LeuLysSerPhe - vagy N-acetil-ThrGluPheGlySerGlu- LeuLysSerPhe-csoport, és B’ jelentése a -HisValPro- HisValGly-csoport, W jelentése Tyr és r jelentése 0 - és sóik előállítására. A találmány különösen az eglin-C, eglin-B, N°-acetil-eglin-C és az eglin-C’ és eglin-C’ módosított eglin- C-vegyületek előállítására vonatkozik. A találmány szerinti transzformált gazdák tenyésztéséhez különböző szénforrásokat alkalmazhatunk. Például előnyös szénforrások az asszimilálható szénhidrátok, így a glükóz, maltóz, mannit vagy laktóz, vagy valamilyen acetát, amely vagy önmagában vagy alkalmas keverékben alkalmazható. Alkalmas nitrogénforrások, például az aminosavak, így a kazein- hidrolizátumok, peptidek és fehérjék és lebomlási termékeik, például a tripton, pepton vagy húskivonatok; továbbá az élesztőkivonatok, malátakivonatok, és ammóniumsók is, például ammónium-klorid, -szulfát vagy -nitrát, amelyeket önmagukban vagy alkalmas keverékekben alkalmazhatunk. Hasonlóképpen szervetlen sókat is alkalmazhatunk, például a nátrium-, kálium-, magnézium- és kalcium-szulfátot, -kloridot, -foszfátot és -karbonátot. Továbbá a közeg tartalmaz növekedést elősegítő anyagokat, így nyomelemeket, például vasat, cinket, mangánt és hasonlókat, és előnyösen olyan anyagokat, amelyek szelekciós nyomást fejtenek ki és gátolják azoknak a sejteknek a növekedését, amelyek az expressziós plazmidot elvesztették. így a közeghez például ampicillint adagolnak, ha az expressziős plazmid amp*-gént tartalmaz. Ha ilyen antibiotikus hatású anyagokat adunk a közeghez, akkor a szennyező, antibiotikum-érzékeny mikroorganizmusok elpusztulnak. A tenyésztés önmagában ismert eljárásokkal történik. A tenyésztés feltételeit, például a hőmérsékletet, a 13
