203673. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vakcina előállítására baromfifélék e. coli baktériumvérűség elleni védelmére
1 HU 203 673 B 2 3. táblázat Csirkék sorszáma Első oltástól eltelt idő (hét) 0 2 4* 6 8 1. <1,7 3,2 4,4 4,1 4,7 2. <1,7 3,8 4,4 4,1 4.7 3. <1,7 3,2 >4,7 4,7 4,7 4. <1,7 4,4 >4,7 >4,7 >4,7 5. <1,7 4,4 >4,7 >4,7 >4.7 *-emlékeztető oltás 6 10 16 Q Broiler tenyésztojók vakcinákba Két csoport, egyenként nyolc darab 2 hetes broiler tenyésztőjéből (Euribrid, Boxmeer, Hollandia) álló kísérleti állatot intramuszkuláris injekció formájában 20 1 ml 2B) és 2C) példa szerint előállított vakcinával kezelünk. Az első injekció után 6 héttel emlékeztető oltást adunk ugyanazzal a vakcinával. Mint a 4. táblázatból látható, hogy erős antitest képződés indult meg az állatok szérumában, amelyhez társul, hogy az antites- 25 tek bekerülnek a tojás sárgájába, valamint a kikelt csibék szérumába. A táblázatban az ELISA vizsgálat eredményének logaritmus értékét adjuk meg. 4. táblázat 30 A fimbria előállításához alkalmazozott törzs Broiler tenyésztojók széruma^ 2 Tojássárgája Kikelt csibék széruma^ CH4 (02:K1:H-)M 4,58 ± 0,50 5,29 ± 0,39 3,98 ± 0,27 AM1727- pPIL291-15 5,48 ±0,21 5,14 ±0,47 4,16 ±0,39 Megjegyzések: 1 A szérummintákat 10 héttel az első injekció után vettük. 2 Az első injekciótól számított 11 hét után vett 8 tojás áUaga 3 Az első injekciótól számított 12 hét után vett tojásokból kikelt S db egyhetes csibe átlaga. Azonos eredményeket kapunk, ha a vakcinálást a CH4 törzsből, illetve az AM1727-pPIL291-15 kiónból előállított FII fimbriával végezzük. A két készítmény között teljes keresztreakció észlelhető ELISA vizsgálattal. 4. példa: Broiler csirkék védelme tenyésztojók vakcinálásával A broiler tenyésztő jókat AM1727-pPIL291-15 kiónból tisztított FII fimbriával [lásd a 3C) példát] vakcinálunk. A vakcináit tenyésztojóktól és nem vakcináit kontroll tojóktól származott broiler csibéket 3 hetes korukban 0,2 ml baktérium szuszpenziónak a jobb hátsó mellkasi légzsákba történő befecskendezésével megfertőzzük. Az alkalmazott baktériumtörzseket E. coli baktériumvérűségben szenvedő csirkék beteg szívéből izoláltuk. A baktériumokat egy éjszakán keresztül véragar bázisú lemezen (Oxoid) tenyésztjük, majd megfelelő koncentrációban PBS-ben szuszpendáljuk. A broiler csibéket csökkentett nyomású izolátorban helyeztük el, ahol tetszőleges mennyiségű táplálékot és vizet találtak. Mint az 5. táblázatból látható, a vakcináit tenyésztojók kellő védettséget adtak át a kikelt broiler csibéknek. A nem vakcináit kontrolihoz viszonyítva az Fl 1 fimbriával végzett vakcinálással kiváltott védelem hatékonysága az alkalmazott törzsekre együttesen számolva 85%. Feltűnő, hogy a védelem a CH7 törzs ellen is érvényes, amely in vitro körülmények között látszólag nem fejez ki F11 fimbriát. Feltehető, hogy ez a törzs in vivo körülmények között a gyakorlatban kifejezi az FII fimbriát, de az in vitro kifejeződés a kimutathatósági határ alatt marad. 5. táblázat Vakcina Fertőzéshez alkalmazott törzs8 CH2 CH4 CH5 CH6 CH7 CH245 összes törzs 078:K80 02:K1 02: KI 01:K1 015:K14 035 :KF11+ F11+ F11+ F11+ FII FI 1+ (5 x 106) (2xl06) (106) (5 x 106) (106) (5 x 106) FII 2/10b 2/10 1/10 0/10 0/10 1/10 6/10c Kontroll 6/10 6/10 10/10 5/10 7/10 5/10 39/60° a Minden törzsre megadjuk a szerotlpust, az Fl 1 kifejezést és az alkalmazott dózist. b A kezeléstől számított 7 napon belül az elhulll csirkék száma/fertőzött állatok Ossz. száma, c „Chi-squaretest”-PS 0,0001 5. példa: Broiler csirkék védelme passzív immunizálással Antiszérumot állítunk elő nyulak tisztított FII fimbriával történő inokulálásával, majd 30 percen ke- 60 resztül 56 °C hőmérsékleten végzett inaktiválással. 6
