203673. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vakcina előállítására baromfifélék e. coli baktériumvérűség elleni védelmére
1 HU 203 673 B 2 1 ml hígítatlan FII antiszérumot intravénásán 3 hetes broiler csirkéknek (Euribrid, Boxmeer, Hollandia) fecskendezünk be. Az antiszérum intravénás befecskendezésétől számított 1 órán belül a csirkéket 0,2 ml baktériumszuszpenziónak a jobb hátsó mellkasi légzsákba történő befecskendezésével fertőzzük. Kontrollként antiszérummal nem kezelt csirkéket fertőzünk ugyanolyan dózisú baktériummal. Az alkalmazott baktériumtörzseket E. coli baktériumvérűségben szenvedő csirkék beteg szívéből izoláltuk. A baktériumokat egy éjszákén keresztül véragar bázisú lemezen (Oxoid) tenyésztjük, PBS-ben szuszpendáljuk, majd a kívánt koncentrációra hígítjuk. A csirkéket csökkent nyomású izolátorban helyezzük el, ahol tetszés szerinti mennyiségű táplálékot és vizet találnak A vizsgálat eredményeiből látható, hogy az Fl 1 fimbria antiszérum megfelelő védelmet biztosít a hat E. coli törzsközül öttel szemben (6. táblázat). A CH6 törzs elleni védelem igen alacsony, bár ez a törzs Fl 1 5 fimbriát termel. Lehetséges, hogy ez a törzs az FII fimbria mellett további egy vagy több más hatékony virulens faktort termel, de lehetséges A is, hogy az antitest szint egyszerűen túl alacsony volt az adott törzs elleni megfelelő védelem kialakításához. 10 Feltűnő, hogy megfelelő védelem érhető el CH7 törzs elleni fertőzéssel szemben is, bár ez a törzs látszólag nem termel FII fimbriát Lehetséges, hogy ez a törzs gyakorlatban in vivo körülmények között termeli az Fl 1 fimbriát, de az in vitro Fl 1 termelés mértéke a 15 kimutathatósági határ alatt marad. 6. táblázat Fertőzéshez alkalmazott törzs Anti FII antiszérum adagolás 7 napon belül elpusztult csirkék összszáma száma szerotípus dózis CH2 078:K80:H4: F11+ 5xl06 + 2/17 CH2 5xl06-15/17 CH5 02:K1:H7:F11 + 106 + 0/8 CH5 106-6/9 CH6 01:K1:H:F11 + 107 + 13/24 CH6 107-19/29 CH7 01:15:K14:H10:F11-2xl06 + 1/8 CH7 2 x 106-6/9 CH245 035:K-H?:F1+ 5xl06 + 2/17 CH245 5xl06-11/19 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás vakcina előállítására baromfifélék E. coli baktériumvérűség elleni védelmére, azzal jellemezve, 45 hogy FII fimbriát vagy annak immunogén szakaszát gyógyszerészeti hordozó anyaggal és adott esetben egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal keverjük, és a keveréket vakcinává alakítjuk 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy E. coli CH4 (02K1JI-) törzsből izolált Fl 1 fimbriát vagy annak immunogén szakaszát alkalmazzuk 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy pPIL291-15 plazmidot tartalmazó E. coli törzsből izolált FII fimbriát vagy annak immunogén szakaszát alkalmazzuk 7
