203673. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vakcina előállítására baromfifélék e. coli baktériumvérűség elleni védelmére
1 HU 203 673 B 2 Aminosav FII1 18 kl)2 Met 1 Cys 2 Pro 6 6.6 Totál 161 161 Megjegyzések: 1- A szekvencia alapján számolva (lásd l.ábra) 2- Meghatározis SODIUM-rendszerben ultrapac 8 oszlop (LKB) segítségével 6n sósavban történő hidrolizálás útin. e) amnoterrmnáüs aminosav-szekvencia: A 18 kD alegység aminovégi első 17 aminosavjának szekvenciája azonos az ismert FII alegység megfelelő szekvenciájával (I. van Die és munkatársai idézett műve, 1986), az 1. ábra a teljes Fl 1 alegység aminosav szekvenciáját mutatja. A szekvencia alapján 16,4 kD értékű aktuális móltömeg számolható. A P fimbria FI 1-hez hasonló adhéziós tulajdonságai láthatóvá tehetők a humán eritrociták mannózrezisztens hemagglutinációjával (mannose resistant hemagglutination of human erythrocytes. MRHA). AzMRHA megvalósítható, ha az adott P fimriát kifejező E. coli baktériumot mannóz jelenlétében megfelelő mennyiségű humán eritrocitával keverjük. Kimutatták, hogy a minimális receptor szerkezet, amely szükséges ahhoz, hogy a P fimbria a humán eritrocitán megtapadjon, egy Galal-4Galß diszach arid (G. Küllenius és munkatársai: Lancet ii, 604-6 [ 1981 ]). Ha ezt a diszacharidot látex szemcsékkel kapcsoljuk, olyan eszközt kapunk, amely baktériumokban látex agglutinálóval specifikusan kimutatja a P fimbriát (P. de Man és munkatársai: J. Qin. Microbiol. 25, 401-6 [1987]). Újabban kimutatták, hogy nem maga az Fl 1 fimbria, hanem az ehhez kapcsolódó speciális adhezin (úgynevezett „kiskomponens”) biztosítja az adhéziót (I. van Die és munkatársai: Microbiol. Pathogenesis 1, 51-56 [1986D. A 2. táblázat az Fl 1 fimbria kifejezése és egy uropatogén E. coli törzs adhéziós tulajdonságai közötti kapcsolatot mutatja, amelyen belül egy FII fimbriát termelő rekombináns kiónt egy sor E. coli baktériumvérűségben szenvedő csirke beteg szívéből izolált E. coli törzzsel hasonlítunk össze. A táblázat adataiból az a következtetés vonható le, hogy a csirkéből izolált E. coli FII fimbriája ugyanazt a receptort ismeri fel, mint a humán E. coli FII fimbriája. 2. táblázat Törzs (a) (szerotípus) FII rojt kifejezése Adhézió ELISA (b) „Western blotting” (c) MRHA(d) P-receptor (e) teszt H291 (01 :K1) >4,7 ++ +++ ++ AM 1727-AM1727/pPIL 291-15 >4.7 +++ ++++ ++++ CH2(078:K80) 3,0 + + + CH4(02:K1) >4,7 ++ ++ ++ CH5(02:K1) 2,7-CH6(01:K1) >4,7 ++ ++ ++ CH7(015:K14)CH96(078:K80) 3,2 + ++ + a) H291: humán E. coli, FII referenciatörzs C1976 AM1727/pPEL291-15: egy FII fimbriát termelő rekombináns klón a rojtmentes KI 2 E. coli AM 1727 törzsből, a CH számok az E. coli baktériumvérűségben szenvedő csirkékből izolált E. coli törzseket jelölik. b) teljes baktérium ELLSA anti-Fl 1 szérummal, az lg érték azzal a legnagyobb szérumhígítással egyenlő, amely a legalább kétszeres háttérérték A540 értékét mutatja. c) A vizsgálathoz a nyers fimbria készítményt anti- Fl 1 szérummal kezeljük. d) Mannóz rezisztens hemagglutináció humán eritrocitákon. 55 e) Agglutináció Gálod - 4Galß bevonatúdátex szemcséken. A jelek értelmezése:-: nincs reaktivitás + -++++: növekvő mértékű reaktivitás. 60 A találmány szerint előállított vakcina hatóanyag-3
