203666. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az interferon-alfa vírusellenes hatását fokozó, dipiridamolt tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására
1 HU 203 666 B 2 mint azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítását a szakirodalom ismerteti. Például a HuIFN-a^ aminosav-szekvenciáját és rekombinációs előállítási eljárását a 0043980 számú Európa-szabadalmi leírás tartalmazza; a HuIFN-a^ fenti jellegzetességeit a 0032134 számú Európa-szabadalmi leírás, a HuEFN-a^ esetében pedig a fentieket a 0115613 számú Európa-szabadalmi leírás ismerteti. A dipiridamolt, illetve annak valamely sóját és az interferont oly módon kell adagolni, hogy azok párhuzamosan legyenek jelen az élő szervezetben. Előnyösen tehát adagolásuk párhuzamosan, illetve alapjában véve párhuzamosan történik. Jelenlegi ismereteink szerint az interferon és a dipiridamol - emberek vírusfertőzésének hatékony kezelésére, illetve megelőzésére alkalmas - előnyös dózisai azok, amelyek legalább 0,1 jjlM-os vérszinteket biztosítanak, pádéul 0,1-5 pM dipiridamol, előnyösebb esetben 0,75-1,5 pM, legelőnyösebb esetben pedig körülbelül 1 pM dipiridamol és több, mint 0,01 NE/ml HuIFN-ot. Nyilvánvaló, hogy az aktuális esetben alkalmazott dózisok változhatnak attól függően, hogy az adott beteg esetében fennálló körülmények és feltételek ismeretében hogyan határoz a beteg kezelőorvosa. A találmánynak a gyakorlatban történő alkalmazása során az interferon adagolása történhet parenterálisan. A dózisok és a dózisszintek előnyösen körülbelül 2 x 103 és 20 x 106 NE, például 2 x 103 és 4 x 106 NE között változhatnak, naponta két alkalommal adagolva az intravénás alkalmazás és naponta egyszer adagolva az intramuszkuláris injekció formájában történő alkalmazás esetében. Az IFN-a megfelelő adagolási formáinak előállítása jól ismert. Parenterális alkalmazás céljára megfelelő adagolási forma előállítása céljából megfeleld mennyiségű HuIFN-a-t oldunk fel 5%-os humán szérum albuminban, mely szükség esetén tartalmazhat valamilyen, megfelelő pufferoldatot is. Az így keletkező oldatot ezt követően bakteriológiai szűrőn juttatjuk keresztül, a megszűrt oldatot - aszeptikus körülmények között - ampullákba töltjük szét, melyek mindegyike az interferon megfelelő mennyiségét tartalmazza, szükség esetén liofüizált formában. Felhasználásig ezeket az üvegampullákat előnyösen hűtve tároljuk (-20 *C hőmérsékleten). Gyógyszerészeti szempontból felhasználható készítmények előállítása céljából - az ismert eljárások segítségével - interferon készítények állíthatók elő oly módon, hogy az interferont valamilyen, gyógyszerészetiig elfogadható vivőanyaggal keverjük össze. A hagyományos vivőanyagok és készítményeik leírása tekintetében E. W. Martin leírására hivatkozunk (Remingtons Pharmaceutical Sciences). A dipiridamol, illetve valamely sójának alkalmazása történhet bármely, szokásos adagolási eljárás szerint, például peror^lisan vagy parenterálisan. Jelenleg a perorális alkalmazást tekintjük az előnyös adagolási módnak. Az ajánlott dózisok 25 és 200 mg közé esnek, tabletták és drazsék esetében például 75-100 mg-nak felelnek meg, naponta négy alkalommal adagolva, az elhúzódó hatóanyagleadású fonnák esetében pedig 150-200 mg-nak, naponta kétszer adagolva. Intravénás alkalmazás esetén a dipiridamol adagolható például folyamatos infúzió formájában is, 3 mg/kg-os napi dózisban. A dipiridamol Persantin márkanéven kapható a kereskedelmi forgalomban, számos adagolási formában, például 10 mg dipiridamolt tartalmazó injekciós oldat és 25, illetve 75 mg dipiridamolt tartalmazó drazsé formájában, amint azt a - Bundesverband der Pharmazeutischen Industrie e. V., D-6000 Frankfurt a. M., West German kiadásában megjelent - Rote Liste 1987 ismerteti. Különböző mennyiségű dipiridamolt tartalmazó, megfelelő adagolási formák állíthatók elő, standard eljárások segítségével. A szakirodalom ezenkívül számos speciális, galenusi készítményt is ismertet, amelyek célja a hatóanyagleadás, Uletve a dipiridamol felszívódásának gyorsítása vagy lassítása (késleltetése). Példaként említhetjük a 0032562 számú Európa-szabadalmi leírásban ismertetett, retard kapszulás adagolási formát, valamint a 0068191 számú Európa-szabadalmi leírásban ismertetett, azonnali hatóanyagleadást biztosító adagolási formát. A 2025 227 számú brit szabadalmi leírás egy további, késleltetett hatóanyagleadású galenusi készítményt ismertet. A találmány alapját az a megfigyelés képezi, hogy a dipiridamol - meglepő módon - fokozni képes a humán IFN-a-nak bizonyos vírustörzsekre gyakorolt vírusellenes hatását. Ennek megfelelően az alábbiak során ismertett vizsgálatot végeztük el: A természetes HuIFN-o^ és a 123I-dal jelzett HuIFN-a^ készítményeket (108 nemzetközi referencia egység [NEj/mg fehérje) a Dr. Kari Thomae GmbH, NSZK-beli cégtől szereztük be, a dipiridamolt pedig a Boehringer Ingelheim Gmbh-tól (W. Germany). A többi kémiai anyag a Nakarai Co. Ltd., Japán cégtől származik. A vírusellenes hatás mérésére olyan vizsgálatot végeztünk, mely a vírusszaporodás gátlásának meghatározásán alapul, a vezikuláris sztomatitisz vírus (VSV) Indiana szerotípusa egyik törzsének felhasználásával, Suzuki és munkatársainak leírása szerint (Mutation Research, 106:357-376,1982). Adipiridamollal és HuIFN-ot-val 24 órán keresztül, a vírus hozzáadását megelőzően előkezelt, ületve elő nem kezelt, humán RSa sejtekben termelt VSV-ből nyert mintákat UVM törzshöz tartozó sejtekhez adtuk hozzá. Az UV2-1 - mely az RSa törzs egyik variánsa -, különösen rezisztens az interferon sejtproliferációt gátló hatásával szemben, a VSV citopatogén hatásával (CPE - Cyto-pathogenic effect) szemben azonban a szokásos érzékenységet mutatja (Suzuki és mtsai, J. Gen. Virol, 67; 651-661,1986). Hy módon tehát a HuIFN-a és a dipiridamol vírustermelésre gyakorolt hatása mérhető az UVM sejtekben észlelhető, VSV citopatogén hatás (CPE) segítségével, azokhoz a vírustermelési szintekhez viszonyítva, me-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
