203666. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az interferon-alfa vírusellenes hatását fokozó, dipiridamolt tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására
1 HU 203 666 B 2 lyeket a kapott VSV-mintákban esetleg visszamaradt szerek által okozott anticelluláris (sejttel szembeni) hatások hiányában mérhetünk. Amint az az 1. ábrán látható, a CPE csökkent azon minták esetében, melyeket a VSV fertőzést megelőzően dipiridamoUal és HuIFN-o-val előkezelt RSa sejtekből nyertünk, bár a kizárólag dipiridamoUal történt előkezelés esetén a CPE lényegében azonos volt az előkezelés nélküli szinttel. A dipiridamolnak a HuIFN-a hatásának fokozására alkalmas koncentrációja meghaladta a 0,1 |iM-t, amint azt a 2A ábra mutatja. A HuIFN-a egységeinek számát tovább növelve azonban a dipiridamol HuIFN-a aktivitást fokozó hatása már állandónak tekinthető - és körülbelül az önmagában adott HuIFN-a víruseUenes aktivitása tízszeresének felel meg amint azt a 2B ábra mutatja. Jelenleg még nem ismerjük teljesen azt a hatásmechanizmust, amelynek közvetitésével a dipiridamol növelni képes a HuIFN-a víruseUenes hatékonyságát, azt tapasztaltuk azonban, hogy a dipiridamol fokozza a HuIFN -a kötődési kapacitást. A kötődési vizsgálatot a Suzuki és munkatársai által 1986-ban leírt módszer szerint végeztük (1. fent). Amint azt a 3. ábra szemlélteti, 0,1- 1 jjlM dipiridamol - a dipiridamoUal nem kezelt sejtekhez képest - körülbelül 1,5-szeresre képes növelni a kötődési kapacitást az RSa sejtekben. Az itt közölt eredmények az első olyan adatok, amelyek a dipiridamolnak az IFN-a víruseUenes aktivitására gyakorolt, meglepő hatását mutatják. I. példa 0,04 mg rHuIFN-Ofyrt tartalmazó lio/ilizált készítmény (1) rHuIFN-ctic 0,04 mg (4 x 106 NE) (2) izotóniás foszfát puffer, pH-7 elegendő mennyiségben (3) humán szárúm albumin 20,0 mg (4) injekciós célra felhasználható víz 1,0 ml Előállítási eljárás A (2) és (3) alkotórészeket az összes szükséges mennyiség 2/3 részében feloldjuk. Ezt követően hozzáadjuk a pontosan meghatározott HuEFN-a^ menynyiséget, majd az oldatot - a megmaradt víz hozzáadásával - az elérni kívánt, végső térfogatra egészítjük ki, egy 0,22 pM-es szűrön átszűrjük, ampullákba töltjük, liofilizáljuk és lezárjuk az ampuUákat. 2-4. példák Az 1. példában leírtakkal azonos eljárás segítségével olyan liofilizált készítményeket áUítottunk elő, amelyek az rHuIFN-a^ alábbi mennyiségeit tartalmazzák, NE-ben (nemzetközi egységben) kifejezve: 2.2xl03 3.2xl05 4.20X106 5. példa Az 1-4. példákban leírt eljárást ismételjük meg, rHuIFN-oc^ és HuIFN-a^ felhasználásával. 6. példa 2xl03-20xl06NE rHu!FN-a2-t tartalmazó liofilizált készítmény (1) IFN-02 2 x 103-20 X106 NE (2) KC1 0,2 mg (3) Na2PH04xl2H20 2,9 mg (4) KH2P04 0,2 mg (5) NaCl 8,0 mg (6) humán szérum albumin 20,0 mg (7) injekciós célra felhasználható víz 1,0 ml Előállítási eljárás A (2), (3), (4) puffer anyagokat, a (6) stabilizálószert, az (S) nátrium-kloridot, valamint az (1) aktív hatóanyagot (7) vízben feloldottuk. Steril szűrést követően az oldatot ampullákba töltöttük sterü körülmények között, majd fagyasztásos szárítást végeztünk. 7. példa A 6. példában leírtakat rHuIFN-a^ és rHuIFN-a2b felhasználásával ismételtük meg. 8. példa 75 mg dipiridamol t tártál mazó drazsé Összetétel: (1) dipiridamol 7,5 kg (2) laktóz 4,2 kg (3) kukoricakeményítő 2,4 kg (4) polivinil-pirrolidin 0,7 kg (5) magnézium-sztearát 0,2 kg Az (l) + (2) + (3) + (4) alkotórészeket összekevertük, majd a keverékhez vizet adtunk, nedves massza előáUítása céljából. A nedves masszát ezt követően 1,2 mm-es lyuknagyságú szűrőn juttattuk keresztül, majd 4S °C hőmérsékleten szárítószekrényben szárítottuk. A száraz szemcséket ezután 1 mm-es lyuknagyságú szűrőn juttattuk keresztül, majd összekevertük az (5) alkotórésszel. A végső keverékből - préselés segítségével - drazsékat készítettünk. A mag tömege 150 mg. Az ily módon előáUított drazsémagokat - ismert eljárás segítségével - felületi bevonattal láttuk el. A bevonat lényegében cukorból és talkumból áll. A bevonat bizonyos esetekben színező anyagokat is tartalmazhat. Az elkészült drazsékat viasz segítségével fényesítettük. A drazsé tömege 200 mg. 9. példa 10 mg dipiridamolt tartalmazó ampulla dipiridamol 10 mg borkősav 4 mg polietilén-glikol 100 mg sósav (1N) a pH-2,7-re történő beállításhoz (elegendő mennyiség) (-0,018 m) injekciós célra felhasználható víz 2 ml A dipiridamolt és a többi alkotórészt vízben felol-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
