203583. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bakteriális fertőzések ellen védő emberi monoklonális antitest-készítmények és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 203583B 29 3. Táblázat 30 Baktériumok Neutrofüok Antitest Komplement A bevitt baktériumok %-os roncsolódása S. marcescens 018 és015 + 4F10 ■u a 0 S. marcescens 018és015 + 6F11Ü + 0 S. marcescens 018és015 4F10 + 0 S. marcescens 018és015 + 4F10 + 85% K. pneumoniae K3ésK12 + 4F10 — 0 K. pneumoniae K3ésK12 + 6F11 + 0 K. pneumoniae K3ésK12 4F10 + 0 K. pneumoniae K3ésK12 + 4F10 + 60% E. aerogenes Izolátumok(2) + 4F10 — 0 E. aerogenes Izolátumok(2) + 6F11 + 0 E. aerogenes Izolátumok(2) 4F10 + 0 E. aerogenes Izolátumok(2) + 4F10 + 85% 3-)- hővel inaktivált (56 °C 30 percen át) humán komplement *(6F11)- Pseudomonas aeruginosa Fisher-féle 2. immuntípus elleni IgM humán monoklonális antitestet tartalmazó tenyészet felülúszó. III. példa A ül. példa módszert mutat be olyan humán monoklonális antitest előállítására, amely reaktív mind Escherichia coli KI típusú tokra, mind Neisseria meningitidis (N. meningitidis) B csoport poliszacharidra, továbbá a példa bemutatja az említett antitest in vivo védő aktivitását homológ E. coli és N. meningitidis baktériumfajok halálos kihívása ellen. Az I. példa szerinti eljárás (lényegében úgy, ahogy az A-G részekben le van írva) ismételjük meg olyan humán monoklonális antitest előállítására, amely kereszt-reaktív az itt leírt baktériumok által okozott fertőzésekre, azzal a kivétellel, hogy szükséges speciális módosításokat végrehajtani az ebben a példában leírt antitestek jellemzéséhez és méréséhez, A következők a változások a meghatározási eljárásokban és az itt leírt monoklonális antitestekkel az eredmények az alábbiak. 1. Öt transzformálásból származó tenyészet felülúszót elemzünk a fenti módszerrel, ez négy olyan üreg azonosítását eredményezi (5D4, 2C10, 9B10 és 8A8), amely anti-E. coli fajlagosságot tartalmaz az E. coli szerotípus lemezen, de nem tartalmaz fajlagosságot S. marcescens vagy kontroll lemezeken. Az ezt követő ELISA mérésekben, amelyeket a korábban leírtak alapján végezzük egyedi E. coli szerotípusokon, azt határozzuk meg, hogy ezek az üregek legalább az alábbi E. coli szerotípusokra reaktív antitesteket tartalmaznak: 01/ATCC 23499/, 07:K1/ATCC 12792/, 06:K1/ATCC 23511/ és 050/CDC 1113-83/, nem reaktívak viszont 04-re (ATCC12792/; 016:K1/ATCC 23511/, és 050/CDC 1113-83/, nem reaktívak viszont 04-re (ATCC 12792/, 06:K2-re /ATCC 19138/, 08:K8-ra /ATCC 40 23501/, 09:K9-re /ATCC 23505/, 022:K13-ra /ATCC 23517/. Jobb viselkedése miatt a klónozási folyamatban, és megnövekedett antitest termelése miatta 9B10 monoklonális antitestet választjuk ki a további elemzésre. 45 A jelen szabadalmi bejelentés benyújtása előtt a folyamatos transzformált sejtvonalat, amelyet itt 9B10-ként azonosítunk, letétbe helyeztük az American Type Culture Collection-nál (Rockville, Maryland) ATCC CRL 9006 számon. 50 2. Az a felfedezés, hogy a kiónok mindegyikéből származó monoklonális antitestek reagálnak az E. coli O-antigén szerotípus azonos csoportjaival, azt jelzi, hogy ezek az antitestek közvetlenül egy olan bakteriális felületi struktúra ellen irányulnak, 55 amely ezekben a szerotípusokban közös. Számos megközelítés használható az ezekben az E. coli szerotípusokban közös felületi szerkezet meghatározására. Amint fentebb jeleztük, a négy, 9B10 antitest által azonosított E. coli szerotípusból kettő (07:K1 60 és 016:K1) a KI tokos szerotípussal rendelkezik, míg a másik kettő (01 és 050) nem volt tipizálva K- antigén szerotípusra. így az a lehetőség is szóba jöhet, hogy a 9B10 antitest a K1 antigénre való reaktivitást tartalmaz, és hogy a E. coli törzsek, amelyek a 65 01 és 050 0-antigén szerotípussal rendelkeznek, 16
