203581. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás optikailag aktív 3-fenil-glicidilsav-észterek előállítására
HU 203581 B (2R, 3S)-3-(4-metoxi-fenil)-glicidát tartalmú reakcióelegy kinyerésére a szén-tetrakloridos fázist elkülönítjük. A szén-tetrakloridos fázis (2R, 3S)-izomer tartalmát a Hl. táblázatban mutatjuk be, az elegy lényegében nem tartalmaz (2S, 3R)-izomert. A termék kromatogramja metü-(2R, 3S)-3-(4- metoxi-fenil)-glicidát csúcsot mutat, amelynek retenciós ideje azonos a 2. példa termékével. III. Táblázat 7 Alkalmazott mikroorganizmus (2R, 3S) izomer tartalom (mg/ml CCU) Nocardia asteroides IFO 3384 1.3 Nocardia gardneri ATCC 9604 0,8 5. Példa AIV. táblázatban felsorolt lipázok és észterázok mindegyikét 1 ml 10 mmól/literes foszfátpuff erben felszuszpendáljuk, pH-jukat az adott enzim opti- 5 mumára állítjuk, majd mindegyikéhez hozzáadunk 4 mg racém-metü-3-(4-metoxi-fenü)-glicidátot tartalmazó 1 ml szén-tetrakloridot, és sztereoszelektív hidrolízist végzünk 30 °C hőmérsékleten 2 napon át. Ezt követően a szén-tetrakloridos fázisokat 10 elkülönítjük a metil-(2R, 3S)-3-(4-metoxi-fenü)glicidát tartalmú elegy kinyerésére, a (2R, 3S)-izomer tartalmat a IV. táblázatban ismertetjük. A szén-tetrakloridos fázis lényegében nem tartalmaz (2S, 3R)-izomert. A termék kromatogramja metil- 15 2-(2R,3S)-3-(4-metoxi-fenil)-glicidát csúcsot mutat, amelynek retenciós ideje azonos a 2. példa szerint nyert termékével. 8 IV. Táblázat Alkalmazott enzim (100 egység) (2R, 3S) izomer tartalom (mg/ml CCU) Alkálikus (Achromobacter eredetű, lipáz gyártó: Wako Junkyaku) 0,7 Lipáz (Chromobacterium viscosum eredetű, gyártó: ToyoJozo) 0,7 Lipáz B (Pseudomonas flagi 22-39B eredetű, gyártó: Wako Junyaku) 0,7 Lipáz M (Mucor javanicus eredetű, ’’Amano” 10 gyártó: Amano Seiyaku) 1.6 Lipáz XI (Rhizopus arrhizus eredetű, típus gyártó: Sigma, USA) 1,8 Talipáz (Rhizopus delemar eredetű, gyártó: Tanabe Seiyaku) 1,8 Lipáz (Rhizopus japonicus eredetű, NK-116 gyártó: Nagase Sangyo) 1.8 Lipáz (Rhizopus nibius eredetű, gyártó: Nagase Sangyo) 1,8 Lipáz VH (Candide cylindracia eredetű, típus gyártó: Sigma) 1.6 Lipáz (Sertés-pankreász eredetű, gyártó: Wako Junyaku) 0,7 Észteráz (Sertés-máj eredetű. gyártó: Sigma, USA) 0,7 Koleszterin (Candida rugósa eredetű, észteráz gyártó: Nagase Sangyo) 1,6 6. Példa Az V. táblázatban felsorolt lipáz enzimek mindegyikéből 10 mg-ot 1 ml 100 mmól/literes foszfátpufferben szuszpendálunk, a szuszpenzió pH-ját az 55 enzim optimumára állítjuk, majd mindegyikhez hozzáadunk 4 mg racém metil-3-(4-metoxi-fenü)glicidátot tartalmazó 1 ml szén-tetrakloridot. A sztereoszelektív hidrolízist 30 ‘C hőmérsékleten 1 napon át végezzük. A reagáltatás befejezése után a 60 metü-(2R, 3S)-3-(4-metoxi-fenü)-glicidát-tartalmú elegy kinyerésére a szén-tetrakloridos fázist elkülönítjük. A szén-tetrakloridos fázis (2R, 3S)-izomer tartalmát az V. táblázatban mutatjuk be, az elegy lényegében nem tartalmaz (2S, 3R)-izomert. A termék kromatogramja metü-(2R, 2S)-3-(4-metoxi-fenü)-glicidát csúcsot mutat, amelynek retenciós ideje azonos a 2. példa szerint nyert termékével. 5
