203581. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás optikailag aktív 3-fenil-glicidilsav-észterek előállítására
HU 203581B ER spektrum: lásd az 1. ábrán NMR spektrum: lásd a 2. ábrán Tömegspektrum: lásd a 3. ábrán 2. Példa Az 1. példában leírt tápközeget az I. táblázatban felsorolt baktériumok valamelyikével beoltjuk, és 30 °C hőmérsékleten 20 órán át tenyésztjük. A mikroorganizmus sejteket 45 ml fenti tápközegből centrifugálással kigyűjtjük, fiziológiás NaCl-oldatban szuszpendáljuk, majd ismét centrifugáljuk. A sejteket 15 ml 10 mmól/literes, 0,01% cetü-trimetil-ammónium-bromidot tartalmazó, pH - 7,5-ös foszfátpuff erben szuszpendáljuk, majd hozzáadjuk 60 mg racém metü-3-(4-metoxi-fenü)-glicidátot tartalmazó 15 ml szén-tetrakloridhoz. A sztereoszelektív hidrolízist 30 *C hőmérsékleten 3 napig végezzük. A reagáltatást követően a szén-tetraldoridos fázist elkülönítjük, és a metil-(2R, 3S)-3-(4-metoxi-fenü)-glicidátot kinyerjük. Ennek az izomernek a mennyiségét az I. táblázatban bemutatjuk. Az elkülönített szerves fázisban lényegében nem találtunk (2S, 3R)-izomert. A fenti optikai izomer mennyiségi meghatározását nagynyomású folyadékkromatográfiás eljárással végeztük, királis OJ <f> sejten, 4,6 x 250 mmm-es oszlopon (gyártó: Died Kagaku Kogyo KJC). A meghatározás körülményei a következők: Az oszlop hőmérséklete: 40 °C Oldószer: n-hexán és izopropü-alkohol 9:1 arányú elegye Áramlási sebesség: 1,0 ml/perc Detektálás: 254 mm (a detektálhatóság határa: 10 mg) A kapott metü-2R,3S-3-(4-metoxi-fenü)^glicidát kromatogramját a 4. ábrán mutatjuk be. Összehasonlításul az 5. ábrán bemutatjuk a racém metil- 3-(4-metoxi-fenü)-glicidát kromatogramját. I Táblázat 5 Alkalmazott mikroorganizmus (2R,3D) izomer tartalom (mg/ml Cl4) Achromobacter cycloclastes IÁM 1013 0,8 Alcaligenes faecalis OUT 8030 0,7 BacUlus sphaericus EFO 3525 0,7 Bacülus subtüis OUT 8104 0,8 Brevibacterium ketoglutamicum ATCC15588 0,7 Corynebacterium alkanolyticum ATCC 21511 1,8 Corynebacterium primorioxidans ATCC 31015 1,8 Providencia alcalifaciens JCM 1673 1,8 Pseudomonas mutabilis ATCC 31014 1,8 Pseudomonas putida ATCC 17453 1,8 Serratia liquefaciens ATCC 27592 1,6 Serratia marcescens ATCC 27117 1,8 3. Példa 500 ml térfogatú rázólombikba 50 ml pH - 6,2-es, 1% glükózt, 0,5% peptont, 0,3% maláta-kivonatot tartalmazó tápközeget mérünk, és 120 "C hőmérsékleten 10 percig sterüezzük. A tápközeget a II. táblázatban felsorolt tenyészgombák vagy élesztők valamelyikének egy platinakacsnyi mennyiségével beoltjuk, és penészgomba alkalmazása esetén 27 °C hőmérsékleten 68 órán át végzett rázatással, élesztő esetén 27 °C-on 20 órán át végzett rázatással végezzük a tenyésztést. A fenti fermentlé 45 ml-éhez 60 mg racém metü-3-(4-metoxi-fenil)-glicidátot tartalmazó 15 ml szén-tetrakloridot adunk, majd az elegyhez hozzáadunk még az elegy mennyiségére számított 0,001 % cetü-trimetü-ammónium-bromidot, és 30 °C hőmérsékleten 3 napig végezzük a sztereoszelektív hidrolízist. A reagáltatás befejezése után a szén-tetrakloridos fázist elkülönítjük, hogy a metü-(2R, 3S)-3-(4-metoxi-fenü)-glicidát tartalmú elegyét nyerjük. A szén-tetrakloridos fázisban a (2R, 3S) izomer mennyisége a n. táblázatban megadott, (2S, 3R) izomer, azaz az antipód, lényegében nincs a reakcióelegyben. A termék kromatogramja a metü-(2R,3S)-3-(4- metoxi-fenü)-glicidát izomernek megfelelő csúcsot mutat, amelynek retenciós ideje azonos a 2. példa szerint nyert termékével. II. Táblázat 6 Alkalmazott mikroorganizmus (2R,3S) izomer tartalom (mg/ml CC14) Absidia corymbifera IFO 4010 0,8 Asperigülus ochraceus IFO 4346 0,8 Asperigillus terreus IFO 6123 1,3 Fusarium oxysporum IFO 5942 0,8 Fusarium solani IFO 5232 0,7 GibbereUa fujikuroi IFO 5268 0,8 Mucor globosus, IFO 6745 1,8 Mucor lamprosporus IFO 6337 1,8 Mucor süvaticus IFO 6753 1,8 Neurospora crassa IFO 6068 0,7 Rhizopus arrhizus IFO 5780 1,8 Rhizopus japonicus IFO 4758 1,8 Trichoderma viride OUT 4208 0,7 Candida parapsüosis IFO 0585 0,8 Saccharomycopsis lipolyctica IFO 0717 1,8 4. Példa 500 ml térfogatú rázólombikba 50 ml pH - 7,3- as, 0,4% glükózt, 0,4% élesztő-kivonatot és 1,0% maláta-extraktumot tartalmazó tápközeget mérünk, és 120 'C hőmérsékleten 10 percig sterüezzük. A tápközeget a Hl. táblázatban felsorolt aktionicéták valamelyikéből egy platina kacsnyi mennyiséggel beoltjuk, és a tenyésztést rázatás mellett 27 °C hőmérsékleten 68 órán át folytatjuk. 45 ml fenti fermentiéhez 15 ml 60 mg racém metil-3-(4-metoxifenü)-glicidát-tartalmú szén-tetrakloridot adunk, majd az elegyhez hozzáadunk az elegy mennyiségére számított 0,001% cetü-trimetü-ammónium-bromidot, és a sztereoszelektív hidrolízist 30 "C hőmérsékleten 3 napon át folytatjuk. Ezt követően a metü-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
