203580. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a GE 2270 antibiotikum A faktor és ezt tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
HU 203580B szer. A nyers GE 2270 antibiotikum készítmény további tisztítása bármely ismert technika segítségével történhet, előnyösen kromatográfiás megoldásokat alkalmazunk, miáltal a GE 2270 antibiotikum A faktort állítjuk elő. Példák az ilyen kromatográfiás eljárásokra azok, amelyeket az előbbiekben a kinyerési lépéssel kapcsolatban említettünk és ide sorolhatók a stacionáris fázison (így szilikagélen, alumínium-oxidon, florisil-en stb.) szerves eluáló fázissal végzett kromatográfia — amelynek során oldószer-elegyeket alkalmazunk, ideértve a halogénezett szénhidrogéneket, étereket, hosszabb szénláncú ketonokat, amelyek jellemző típusait az előbbiekben már megadtuk —, vagy a szilanizált, különböző funkciós származékká alakított szüikagélen végzett fordított fázisú kromatográfia, amely esetben az eluálást az előbbiekben említett típusú vízzel elegyedő oldószerek vizes elegyeivel végezzük. Célszerűen alkalmazható az ún. sztérikus kizárásos kromatográfiás technika is, amely jó tisztítási eredményeket szolgáltat. E technika keretében konkréten hasznosan alkalmazhatók a meghatározott pórus-méretű keresztkötéses dextránok, amelyekben a hidroxü-csoportok többsége alldlezett; üyen pl. a Sephadex LH- 20 (Pharmacia Fine Chemicals, Ab). Mint ez a szakember számára ismert, a termelési, valamint a kinyerési és a tisztítási lépés is számos analitikai eljárással követhető, ideértve a biológiai vizsgálatokat (amüyen a papírkorongos vagy agardiffúziós meghatározás érzékeny mikroorganizmusok alkalmazásával), vagy a TLC vagy a HPLC technika, amelyek egy UV-vel való vagy mikrobiális kimutatási lépést foglalhatnak magukban. Kitüntetett HPLC technikát képvisel egy olyan fordított fázisú HPLC, amelynek jellemzői a következők:- porózus és szférikus szüanizált szüikagél részecskéket tartalmazó oszlop; alkalmazhatunk pl. C-18 alkü-csoportokkal funkciós származékká alakított szilikagélt, amelynek részecskéi azonos átmérőjűek (így a Beckman Co. által gyártott 5 pm-es Ultrasphere ODS Altex);- egy elő-oszlop, amely C-18 alkü-csoportokkal funkcionálisan átalakított szüikagélt tartalmaz (üyen pl. az RP18, Brownlee Labs) és- egy eluálószer, mégpedig egy pl. az előbbiekben leírtaknak megfelelő — poláris, vízzel elegyedő oldószer lineáris grádiense egy vizes puffer-oldatban. Ezt az oldatot előnyösen pH 5-7-re áüítjuk be. Egy különösen kitüntetett eluálószer pl. a következő összetételű: 45-70% A eluálószer lineáris grádiense B eluálószerben, amely utóbbi acetonitrü: pH 5-7 vizes puffer 10:90 elegye. Az A eluálószer acetonitrü: pH 5-7 vizes oldat 70:30 elegye. A GE 2270 antibiotikum A faktor fizikokémiai jellemzői A) az 1. ábrán látható UV abszorpciós spektrum, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja: 9 10 0.1MHC1 245(váU, 310 0.1MKOH 245 (váll) 313 7,4 pH-jú foszfát puffer 245 (váll) 314 metanol 265 244(váU)310 B) A 2. ábrán látható IR abszorpciós spektrum nujol pólyában, amely a következő abszorpciós maximumokat mutatja (cm y. 3700-3060; 3060-2660 (nujol); 1650; 1590-1490; 1490-1420 (nujol); 1375 (nujol); 1310; 1245; 1210; 1165; 1090; 1060; 1020; 970; 930; 840; 810; 750; 720; 700. E spektrumban a főbb funkcionális IR abszorpciós sávok a következőképpen minősíthetők: v,cm ^ eredet 3600-3100 vNH, vOH 1650 Iamid(vC=0) 1545 heterociklus vC=C és vC=N 1525,1495 namid(ÖNH) 1250,1205 aromás 6CH 870 heterociklus yCH 745,700 aromás yCH C) A 3. ábrán látható %-NMR spektrum a következő jel-csoportokat (ppm-ben) mutatja 500 MHz-en, DMSO-d 6-ban felvéve: (DMSO- hexadeutero-dimetü-szulfoxid), belső standardként (0,00 ppm) TMS (tetrametü-szüánt) használva. Zárójelben az egyes jelekhez tartozó protonok számát tüntetjük fel: 9,02 (1), 8,68 (1), 8,70 (1), 8,57 (1), 8,50 (1), 8,43 (1), 8,37 (1), 8,26 (1), 8,25 (1), 7,4-7,20 (9), 6,96 (2), 6,03 (1), 5,30-5,18 (3), 5,01 (1), 4,97 (2), 4,80 (1), 4,56 (1),4,30 (1), 4,26 (1), 3,98 (1), 3,81 (1), 3,79 (1), 3,38 (3), 2,72 (1), 2,58 (3), 2,48 (3), 2,16 (1), 2,13 (1), 1,96(2), 1,88(1), 1,34(1) (L87 (3), 0,84 (3). D) A 4. ábrán látható x C-NMR spektrum a következő jel-csoportokat mutatja (ppm-ben) 125 MHz-en, DMSO-dbban, belső standardként (0,00 ppm) TMS alkalmazásával. Q jelentése kvatemer szénatom vagy C=0 csoport: 173,69, Q; 171,10, Q; 169,83, Q; 169,51, Q; 168,45, Q; 168,26, Q; 167,84, Q; 165,68, Q; 164,75, Q; 161,40, Q; 161,23, Q; 160,46, Q; 160,29, Q; 159,35, Q; 153,42, Q; 150,31, Q; 150,11, Q; 149,41, Q; 146,93, Q, 144,73, Q; 143,75, Q, 142,10, Q; 141,78, Q; 141,33, CH; 140,97, Q; 139,53, Q; 128,68, CH; 127,99, 2(CH); 127,67, Q; 127,67, CH; 126,88, CH; 126,76, 2(CH); 123,17,CH; 118,66,CH; 116,42, CH; 73,81, CH; 69,41, CH2 67,97, CH; 67,36, CH2 60,12, CH; 58,63, CH3 58,24, CH; 55,41, CH; 48,15, CH; 47,03, CH2 41,19, CH2 37,60, CH2 34,06, CH; 29,76, CH2 25,85, CH3 24,28, CH2 18,49, CH3 17,98 CH311,99, CH3 E) Retenciós idő (Rfc 14,9 perc, fordított fázisú HPLC-vel a következő körülmények között végezve a vizsgálatot: oszlop: Ultrasphere ODS (fordított fázisú szüanizált szüikagél; 5 |im; Altex, Beckman); 4,6 mm (bel-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
