203565. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kis molekulatömegű heparin, heparán-szulfát, dermatán-szulfát és sóik, valamint ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására

1

Hü 203 565 B

2

2. példa

Egy termosztált reaktortartályba adunk 200 g 116,7 HFA heparint, 200 g nátrium-acetát-trihidráttal és 200 g nátrium-kloriddal együtt, majd hozzáadunk 2100 ml 0,02 mól/l-es Cu++-só oldatot (9,52 g/100 ml-es oldat). Amikor a komponensek feloldódnak az elegybe csepegtetünk 15 perces időközönként külön-külön 500 ml 19%-os hidrogén-peroxidot és 1 n NaOH-oldatot, így a reakcióelegy pH-ját 7,2-n tartjuk. A reakciótartályban a hőmérséklet 35- 50'C.

A reakció elkezdésétől számított 60 perc múlva 30 g EDTA-Na-t adunk az elegybe. Az oldat pH-ját ecetsavval 5,9-re állítjuk, és a terméket 2 térfogatnyi metanollal kicsapjuk.

A csapadékot acetonnal mossuk, majd közvetlenül (szárítás nélkül) ismét 2 liter vízben feloldjuk. Ezután 5 g EDTA-t és 50 g nátrium-acetátot adunk a rendszerbe. A pH-t 6-ra állítjuk és az elegyhez állandó keverés közben 2,5 térfogatnyi metanolt adunk. 20

A terméket szűrjük, acetonnal vízmentesítjük és szárítjuk. íly módon 183 g OP 84/2610 jelzésű nyersterméket kapunk.

Kitermelés: 91,5%.

A termékjellemzői az 1. táblázatban találhatók.

Az l.b. ábrán bemutatjuk a 116.7 heparin depolimerizálás során kapott aktivitás értékeket. Az ábrán alkalmazott jelölések értelmezése:

A találmány 2. példája szerinti reakció során min- 5 den 5. percben vett minta elemzése:

U-APTTés

U-AXa grafikus ábrázolásával.

Hasonlóan tüntetjük fel az enzimesen depolimerizált heparinoknál (2. ábra) a gélszűréssel kapott hepa- 10 rin frakcióknál (3. ábra) biológiai aktivitást a molekulatömeg függvényében.

A 2. ábrán az U-APTT egyenes egyenlete:

Y-0,9956 x-4,28 15 (R- 0,9912)

A 3. ábrán

U-APTT Y-1,6067 x-63,1474 (r- 0,9706)

U-AXaY-268,7118 -[12243,105/x]

(r-0,9837)

R - U-AXa/U-APTT

7. Táblázat

Termék

In vitro hatás U-APTT U-AXa

In vivo hatás antitrombin hatás i.v.

Molekulatömeg

S%

Uronsav-S03H/ /-COOH

Hep 116,7

170,7

166,8

135

13700

10,6

26,7

2,39

Es. 1

Op84/2610

32,1

72,3

127

3480

11,0

26,1

2,56

A2. példa termékének réztartalma 3,93 ppm.

Az antitrombotikus hatás in vivo módon a Reyers S., Mussoni L„ Donáti ME., De Gaetano G., Thromb. Rés. 18, 699,1980 szakirodalmi helyen közölt módszerével határoztuk meg intravénás alkalmazással. A ként és az uronsavakat potenciometriásan mérjük, miután az esetleges szervetlen savtartalmat kromatográfiásan, OH-formájú anionos kolonnán eltávolítottuk, és a heparinsavat egy kationcserélő kolonnán (H+) átengedve felszabadítottuk. A két titrálási görbe közötti arány megfelel a "S03He_/'COOH eq aránynak.

Orális alkalmazásnál tapasztalt biológiai felhasználhatóság

Ha a terméket a Reyers és munkatársai szerinti vénás trombózisos modellben az emésztőcsatornán keresztül alkalmazzuk egy megfelelő lipidtartalmú vivőanyaggal és stabil micellás rendszert biztosító felületaktív anyaggal (Stanzani L., Mascellani G., Corbelli G. P., Bianchini P„ J. Brit. Pharmacol., 33, 783, 1981), akkor a tromus tömeg felezésére kapott ED50 értékek az alábbiak:

HFA 116,7- 7,5 mg/kg Op 84/2610- 3,25 mg/kg.

3. példa

Termosztált fürdővel, keverővei, kalibrált csepegtető tölcsérrel és hőmérővel ellátott reaktortartályba 1 kg HFA 15 nyers heparint, 0,495 kg nátrium-ldoridot és 1 kg nátrium-acetátot adunk, majd az így beadagolt anyagot 10 liter vízzel oldjuk (10 g/100 ml-es oldat). Egy liter vízben feloldunk 46 g réz-acetát-mo- 45 nohidrátot és ezt az oldatot a reakcióoldathoz adjuk. A hőmérsékletet 35 *C-ra beállítjuk és 2,5 óra alatt annyi 1 n NaOH oldatot adunk a rendszerhez, hogy a pH 7,5 legyen, majd 9%-os hidrogén-peroxid-oldatot adunk a reakcióelegybe. A belső hőmérsékletet folya- 50 matosan úgy szabályozzuk, hogy a hőmérséklet 35 ‘C és 60 ‘C között legyen.

A reakció alatt szabályozott időközönként mintát veszünk, hogy az in vitro hatásra vonatkozó paramétereket (U-APTT és U-AXa) és az átlagos molekulatö- 55 meget ellenőrizzük.

A reakció végén az elegybe adunk 90 g EDTA-t, a pH-t 30%-os ecetsavval 5,9-re beállítjuk és hozzáadunk 44 liter metanolt.

A keletkező csapadékot leszűrjük, metanollal mos- 60 suk és ismét 10 liter vízben feloldjuk.

5