203553. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás oxetanocin G előállítására
1 HU 203 553 B 2 Elemanalízis eredmények: számított: C-43,94%, H=5,49%, N=30,90%; talált: C=43,63%, H=5,30%, N=30,53%. (2) 2-armno-OXT-A-hidrogén-klorid előállítása 5.0 g 2-amino-OXT-AxO,5 H20-t 33 ml vízben szuszpendálunk, és hozzáadunk 3,42 ml 20%-os hidrogén-kíorid-oldatot, és a kapott oldathoz ezután 33 ml etanolt adunk. Az elegyet 5 °C-on 20 órán keresztül állni hagyjuk. A kicsapódott kristályokat leszűrjük és kis mennyiségű 50%-os etanollal, majd kevés etanollal mossuk. Az anyagot csökkentett nyomáson szárítjuk. 29,3 g 2-amino-OXT-A x HCl-t kapunk. Elemanalízis eredmények a C, 0Hj 4N603HC1 öszszegképlet alapján: számított: C=40,04%, H=5,02%, N=28,28%, 0=10,31%; talált: C=39,68%, H=5,00%, N=27,76%, 0=11,71%. NMR-spektrum (200 MHz, D20) 6 ppm: 8,30 (1H, s, 8-H), 6,29 (1H, d, J=4,8 Hz, l’-H), 4,65 (1H, m, 3’-H), 3,60-3,95 (5H, m). (3 )OXT-G előállítása 1. 2.0 g 2-amino-OXT-A-t 300 ml, 0,1 mól/1 koncentrációjú foszfát-puff erben (pH 6,5) oldunk, majd az oldathoz 200 egység 5’-adenilsav-dezaminázt (gyártja a Sigma Co., A-1907) adunk, és az elegyet 37 °C-on 50 órán keresztül keverjük. A reakcióelegyet 300 ml MCI® GEL CHP 20-szal töltött oszlopon folyatjuk keresztül, és az oszlopon megkötött reakcióterméket vízzel eluáljuk. Összegyűjtjük a szilikagélen vékonyréteg-kromatográfiás eljárással kb. 0,42 Rf értékű frakciókat (futtatóelegy: n-butanol, ecetsav és víz 4:1:2 térfogatarányú elegye), és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 1,8 g OXT-G-t kapunk, színtelen kristályok formájában, a hozam 90%. FD-MS: 268 (M+H)+ UV-spektrum: XpmHa6x0 (log e) 253,5 nm (4,09) NMR-spektrum (400 MHz, D20) 8 ppm: 3,69-3,87 (5H, m), 4,66-469 (1H, m), 6,29 (1H, d), 8,17 (lH,s). (4) OXT-G előállítása 2. 2.0 g 2-amino-OXT-A-t 300 ml 0,1 mól/1 koncentrációjú foszfát-pufferben (pH 6,5) oldunk, majd az oldathoz 8,0 g 5’-adenüsav-dezaminázt (gyártja az Amano Pharmaceutical Co., Ltd. DEAMIZYME®) adunk, és az elegyet 37 °C-on 70 órán keresztül keverjük. Az oldhatatlan anyagokat a reakcióelegyből szűréssel eltávolítjuk, és a szűrletet 50 ml aktívszén-porral (gyártja a Wako Pure Chemical Industry K. K„ kromatográfiás célokra) töltött oszlopon folyatjuk keresztül. Az oszlopot vízzel mossuk, majd az eluálást 50%-os vizes metanollal végezzük. A kívánt f rakcióka t szárazra párolva nyers OXT-G-t kapunk. A poralakú nyersterméket 50 ml vízben oldjuk, és az oldatban lévő OXT-G-t 300 ml MCI® GÉL CHP 20-on adszorbeáljuk, majd vízzel eluáljuk. A kívánt frakciókat koncentráljuk és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 1,5 g OXT-G-t kapunk, színtelen, kristályos anyag formájában, a hozam 75%. A kiindulási anyagként használt alkoxi-2-amino- OXT-A-t az alábbiak szerint állítjuk elő. Alkoxi-2-amino-OXT~A[(5) vegyidet] szintézise OXT-A-ból (a) (7) vegyidet szintézise 150 g OXT-A-t 2,21 víz és 11 metanol elegyében oldunk, és az oldathoz 0,751,139 g m-klór-perbenzoesavat tartalmazó metanolos oldatot adunk. A reakcióelegyet fénytől védve, szobahőmérsékleten 18 órán keresztül keverjük, majd újabb 28 g m-klór-perbenzoesavat adunk hozzá metanolban oldva. A keverést 5 órán keresztül folytatjuk. Az oldhatatlan anyagokat leszűrjük, a szűrletet 2,0 literre koncentráljuk és a koncentrátumot kétszer 1,51 etü-acetáttal extraháljuk. A vizes fázist, 1,51-re koncentráljuk, majd a maradékhoz 0,51 vizet adunk. Az elegyet 2,01 MCI® GÉL CHP 20-szal töltött oszlopon folyatjuk át. Az áthaladt folyadékot és a 8,21 mosófolyadékot összegyűjtjük és szárazra koncentráljuk. 146,4 g (1) képletű vegyületet kapunk, a hozam 91,7%. FAB-MS m/z: 268 (M+H)+ NMR-spektrum (60 MHz, D20) 8 ppm: 8,73 (1H, s), 6,71 (1H, d), 4,70 (1H, m), 3,99-4,30 (5H,m),4,66(lH,m,3’-H). (b) (2) vegyidet szintézise 129,3 g (1) vegyületet 5,71 metanolban oldunk, és az oldathoz 0,45155,5 g cián-bromidot tartalmazó metanolos oldatot adunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2 órán keresztül keverjük. A (2) vegyület csapadék formájában kiválik, de a vegyület tökéletesebb leválasztására 3,01 etil-acetátot adunk az elegyhez, és 20 percen keresztül keverjük. A kristályos csapadékot leszűrjük és etü-acetáttal mossuk. Csökkentett nyomáson végzett szárítás után 146,48 g (81,1 %) (2) vegyületet kapunk, színtelen kristályok formájában. Az anyalúgot koncentráljuk és 11 metanolból és 11 etil-acetátból kristályosítjuk. Ugyanezzel az eljárással 13,26 g (7,3%) (2) vegyületet kapunk, színtelen kristályok fomájában. FD-MS m/z: 294 (M+H-Br)+ IR-spektrum (KBr): 1720 cm’1 (C=NH) NMR-spektrum (200 MHz, DMSO-dó, TMS) 8 ppm: 10,70 (1H, széles s, NH), 10,13 (1H, s, 8-H), 9,35 (1H, s, 2-H), 6,61 (1H, d, J=4,84 Hz. l’-H), 4,70 (1H, m), 2,50 (3H, m) UV-spektrum A.1^0^ 223,283 nm. (c) (3) vegyület szintézise 159,6 g (2) vegyületet 6 1 metanolban szuszpendálunk, majd a szuszpenzióhoz 1,61 ammóniával telített 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 4
