203367. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szomatotropinok kinyerésére híg vizes oldatból
HU203367B A találmány tárgya eljárás szomatotropinok híg vizes oldatokból való kinyerésére. A találmány közelebbről bioaktív szomatotropin vizes oldatokból való kinyerési eljárására vonatkozik, amelynek során az oldatokhoz cink, réz, kobalt, mangán vagy vas klorid, szulfát, acélát vagy tartarát sóját adjuk. A szomatotropinok polipeptid hormonok, amelyeket növekedési hormonként is ismernek, és sok állatfaj hasnyálmirigye választ ki. Ezek a hormonok számos gyógyászati felhasználásra alkalmasak, és szomatotropinokat tartalmazó készítményeket emberek növekedési hormon hiányának és emésztőrendszeri vérzés kezelésére vagy csonttörések gyógyulásának elősegítésére és zúzódások és más sebek gyógyulásának gyorsítására adagolhatunk. A szomatotropinok elősegítik az állatok tej és hústermelését is, ha különböző hatóanyagleadó eszközök segítségével vagy injekció formájában a szervezetükbe juttatjuk [lásd E.J. Turman, „Some Effects of pituitary Anterior Growth Factor” Thesis: Purdue University, 1953. április: L. J. Machlin, J. aniro. Sei.. 55,794-800 (1972); T.R. Kasser és munkatársai, J. Anim. Sei., 55,420-426 (1981); I.. J. Machlin, J. Dairy Sei., 56,575-580 (1973)]. Noha a szomatotropinok valamelyest fajtaspecifikusak, az állati szomatotropinok aminosavsorrendjei között figyelemreméltó hasonlóság van, és ezekről a hormonokról kimutatták, hogy más fajoknak beadva is fejtenek ki hatást. Emellett a szomatotropinok különböző hatásos fragmentjeit is felfedezték. A szomatotropinokat kimetszett hipofízis szövetből szokták elkülöníteni. A rekombináns DNS technológia alkalmazásával lehetővé vált, hogy olyan, genetikailag átalakított mikroorganizmusokból különítünk el szomatotropinokat, amelyek szomatotropin termelést specifikáló rekombináns DNS-t tartalmaznak. Ilyen eljárásról számolnak be például a biogen N.V 83304574.3 bejelentési számú és 0 103 395 számon nyüvánosságra hozott európai szabadalmi bejelentésben. Akár állati, akár mikrobiális eredetű a szomatotropin, az esetleges szennyezőket, például más fehérjéket, polipeptideket és a sejt törmeléket el kell távolítani, és a fehérjét tökéletesen szabaddá tett, bioaktiv formában rendelkezésre bocsátani. A szomatotropin tisztítására egy vagy több ismert fehérje tisztítási módszert, így például gélkromatográfiát, affinitás kromatográfiát, ioncserélő kromatográfiát, ultraszűrést, dialízist, sókkal, például ammóniumszulfáttal való kicsapást, a zárványtest guanidinhidrokloriddal vagy nátrium-dodecil-szulfáttal való extrakcióját és még sok más ismert módszert alkalmazhatunk. A szomatotropin esetében használható különböző tisztítási eljárásokról például a Kirk-Othmer Encyclopedia of Chemical Technology (3rd Edition, Volume 11) című művében, a 4 371 462 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban (Hecht) és Hart és munkatársai [Biochem J., 218,573-581 (1984)] cikkében olvashatunk. Ezen tisztítási eljárások legtöbbjének eredményeként szomatotropint tartalmazó híg vizes oldatot kapunk, így a tisztított szomatotropin ezekből a vizes oldatokból való elkülönítésére egy kinyerési eljárásra van szükség. 1 Jelenleg a szomatotropint a hormon híg vizes oldatának fagyasztva szárításával izolálják. A liofüizálás azonban szárított biológiailag aktív anyag kinyerése esetén költséges eljárás az alacsony hozam, a drága készülék és annak szükségessége miatt, hogy a nyomást nagyon alacsony értéken kell tartan i a fagyott állapotban lévő víz szublimálása alatt. A liofilizálás különösen költségigényes nagy mennyiségekkel végzett munkánál az oldószer nagy térfogata miatt. Olyan eljárásra volt szükség a szakterületen, amely kevésbé költséges, és a szomatotropin bioaktivitását károsan nem befolyásolja. A találmány tárgya egy nem drága eljárás szomatotropin vizes oldatból való kinyerésére bioaktivitásának csökkentése nélkül. A találmány célja emellett, hogy a szokásos kinyerési eljárásoknál kisebb készülékköltséget igénylő eljárást szolgáltasson. A jelen találmány további célja, hogy olyan eljárást biztosítson a szomatotropin vizes oldatokból való kinyerésére, amely a jelenlegi módszerekhez viszonyítva csökkenti a munkaköltségeket is. A találmány tehát a szomatotropin híg vizes oldatokból való kinyerési eljárására vonatkozik, amely során a szomatotropinnal oldhatatlan komplexeket képező átmeneti fémek sóit adjuk a vizes oldatokhoz. Az oldhatatlan komplexeket az oldatból centrifugálással vagy szűréssel elválasztjuk, majd liofilizálással, a víz alacsony hőmérsékleten, vákuumban való eltávolításával vagy más módszerekkel megszáríthatjuk. Az eljárás végén a szárított bioaktív szomatotropint kinyerjük. A találmány szerinti eljárás például hipofízis homogeniztiumból vagy fermentlébői származó szomatotropin tisztításakor kapott híg vizes oldatok szomatotropin tartalmának elkülönítésére szolgál. A találmány szerinti eljárás különböző típusú, például természetes vagy rekombináns sertés, borjú, juh, emberi, szárnyasok (tyúkfélék) vagy hal szomatotropinoknak híg vizes oldatból való elkülönítésére használható. A szomatotropin elnevezés magába foglalja a természetes vagy rekombináns szomatotropint, valamint azok növekedést serkentő származékait. Ilyen például a polipeptid hormon olyan bioaktiv fragmensei, mint a A4 szerkezetű borjú szomatotropin (olyan polipeptid, amelynek N-terminálisáná! négy aminosav hinyzik, a Biogen korábban említett európai szabadalmi bejelentésében írták le), és a A7 sertés szomatotropin, amelynek aminosavsorrendje megfelel a sertés szomatotropinénak azzal az eltéréssel, hogy az érett, teljes hosszúságú hormon első hét aminosava hiányzik (a Biogen N. V. 0 104 920 számon nyüvánosságra hozot európai szabadalmi be jelentésében írták le). A szomatotropin elnevezés magába f oglal ja azt a hatásos polipeptid fragmentet is, amely egy extra N-terminális metionint tartalmaz. A „biológiaüag hatásos” kifejezés olyan polipeptidre vonatkozik, amely egy élőlénynek beadva az élőlény biológiai folyamataira kimutatható hatással van. Egy biológiailag aktív szomatotropin képes egy élőlény növekedésének sebességét fokozni, ha az élőlénynek a növekedés fokozása szempontjából hatásos mennyiségekben ad-2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
