203352. lajstromszámú szabadalom • Új makrolid vegyületeket tartalmazó nematocid és akaricid készítmények, eljárás új makrolid vegyületek és az ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 203 352 B 2 Granulátumok készítése (a) hatóanyag 50 g fa-gyanta 40 g gipsz granulumok (0,25-0,75 mm) 1 kg-ra (pl. Agsorb 100A) (b) Hatóanyag 50 g Synperonic NP13* 40 g gipsz granulumok 1 kg-ra (0,25-0,75 mm) * ICI védjegy Egy illékony oldószerben, például metilén-klorodban minden összetevőt feloldunk és az oldatot keverékben forgatott granulátumokra öntjük, majd a készítményt az oldószer eltávolítására szárítjuk. A következőkben a találmány szerint előállított vegyületek biológiai hatását mutatjuk be. Az alábbi vizsgálati eljárásokat alkalmaztuk. Egér szkríneléses vizsgálat 18-20 g testömegű nőstény egereket (Manor White Swiss) 20 N. dubius lárvával fertőzünk be. A lárvákkal való befertőzést követően három hét múlva az egereket orálisan, gyomorszondán át a vizsgálandó vegyület egyszeri dózisával kezeljük. A kezdeti vizsgálati dózis 1000 mg/kg. A vegyületeket Vortex keverőben üveggyöngyök alkalmazásával porítjuk, majd 0,2%-os agarban oldjuk vagy szuszpendáljuk. Az oldatból vagy szuszpenzióból 0,5 ml-t adunk be orálisan egy-egy egérnek. A kezelést követő harmadik napon az egereket leöljük és felboncoljuk, az egyenként 4 egérből álló kezelt csoportok állataiban talált átlagos N. dubius számot statisztikusan a 20 kezeletlen állatból álló kontrollcsoportban talált átlagos N. dubius számhoz hasonlítjuk. Caenorhabditis elegáns elleni hatás szkrínelése A vizsgálandó vegyietekből 300 ppm-es oldatot készítünk vizes acetonban. Az egyes vegyietek oldatából 25 pl-es alikvot részt 96 lyukú lemezre viszünk. Az oldószert elpárologtatjuk és a lemezt a vizsgálathoz való alkalmazás előtt egy hétig tároljuk. A mikrotiter-lemez egy-egy lyukába 50 pl, mintegy 25 kifejlett C. elegáns tartalmú oldatot adunk. A lemezeket szobahőmérsékleten tároljuk, és 4 és 24 óra múlva leolvassuk. Ha a 24 óra elteltével teljes mortalitást észlelünk, a vegyületet további vizsgálatra érdemesnek tartjuk, és in vivo rágcsáló-modellben folytatjuk a vizsgálatot. Ha a teljes mortalitásnál kisebb aktivitást észlelünk, a vegyületet aktívként jelöljük meg, de az ilyen vegyietek érdeklődésre nem tarthatnak számot. Ha hatást nem észlelünk, a vegyületet inaktívnak nyilvánítjuk. Psoroptes cuniculi - száraz szűrőpapír teszt Anyagok Polisztirolból készült eldobható Petri csészék, 35*100 mm, Falcon 1008 Szűrőpapír, Whatman 934-AH, üveg mikroszál 3,7 és 3,5 cm Aceton, reagens minőségű Vazelin 3 mm-es szilárd üveggyöngyök Különféle pipetták Nagy kerámia lemezek vagy ezek megfelelői Nyúl donorból gyűjtött fül-atka Módszerek A vizsgálandó hatóanyagok előkészítése A vizsgálatot megelőző napon vagy a vizsgálat reggelén a hatóanyagokat acetonban feloldjuk, és a kívánt koncentrációra hígítjuk. A koncentrációkat úgy számítjuk, hogy 400 pl oldat tartalmazza az egy szűrőpapírra felvinni kívánt mennyiséget. Az oldatból 400 pl-t pipettázunk egy 3,7 cm átmérőjű felső és egy 3,5 cm-es átmérőjű alsó szűrőpapír korongra, és ezeket kerámia lemezre helyezzük száradni. Megjegyezük, hogy ezt a műveletet fülke alatt végezzük. A szűrőpapír egyik oldala sima, a másik durva. A hatóanyagot a durva oldalra visszük, ezt az oldalt száradáskor felfelé helyezzük el. A korongokat száradás után durva felükkel egymásra borítva Petri csészébe helyezzük egymástól egy 3 mm-es üveggyönggyel elválasztva. A csészéket - amennyiben előző nap készítettük el - éjszakán át szobahőmérsékleten tartjuk. 0,01, 0,1 és 1,0 pg/cm2 CL 301 423-t alkalmazunk minden vizsgálatban standardként. Atkák összegyűjtése és adagolása A vizsgálat reggelén fertőzött nyulak füléből atkákat tartalmazó varat gyűjtünk. Ezt az anyagot nagy Petri csészébe helyezzük megvilágított nagyító alá. Az atkák kimásznak a varból, és boncolótű hegyén vagy finom csipesz egyik ágának végén könnyen összegyűjthetők. Az egyes Petri csészékben lévő felső szűrőpapírt eltávolítjuk, az alsó szűrőpapírra 12 atkát helyezünk, majd a felsőt visszahelyezzük. A Petri csésze fedelének visszahelyezése előtt a csésze peremét vazelinnel bekenjük, hogy az atkáknak a csészéből való menekülését megakadályozzuk. A vizsgálatokat általában dózisonként 4 párhuzamos mintán végezzük, amelyek közül kettőt 4 óra, kettőt 24 óra elteltével értékelünk az atkák megszámolásával. Az atkáknak a Petri csészébe a fenti módon történő behelyezését követően a párhuzamos mintákat egy tálcára helyezzük, majd a tálcát néhány nedves törölközővel együtt műanyag zacskóba tesszük, és szobahőmérsékleten tároljuk. A kezelt atkák értékelését az alábbi módon végezzük 1) A csészét óvatosan kinyitjuk, a felső szűrőpapírt eltávolítjuk, és megőrizzük. 2) Az alsó szűrőpapírra puha ceruzával kis, mintegy 1/2 cm átmérőjű kört rajzolunk. 3) Eldobható pipettával enyhén megnedvesítjük a kör körüli felületet. 4) A csészében lévő minden atkát a körön belülre viszünk. Gondosan ellenőrizzük a csésze fedelét a felső szűrőpapírt és az alsó szűrőpapír alatti részeket. 5) Megszámoljuk a körön belüli atkák számát, és a számot feljegyezzük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 9
