203347. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új kondenzált diazepinonok és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 203 347 B 2 pufferrel öblítettük és meghatároztuk radioaktivitásukat. Ez az érték a 3H-NMS specifikus és nem-specifikus kötődésének összegét mutatja. A nem-specifikus kötődés arányát úgy definiáltuk, hogy az az 1 pmólos kinuklidinil-benzilát jelenlétében megkötődött radioaktivitásnak felel meg. Mindig 4 párhuzamost mértünk. A nem jelzett vizsgálandó anyagok IC50-értékét grafikusan határoztuk meg. Ez az érték a vizsgálandó anyagnak az a koncentrációja, amely a 3H-NMS specifikus kötődését a muszkarinreceptorokhoz a különböző szervekben 50 %-ban meggátolja. Az eredmények az 1. táblázatban láthatók. B. Az antimuszkarin hatás funkcionális szelektivitásának vizsgálata Az antimuszkarin tulajdonságú anyagok gátolják a kívülről bevitt agonisták vagy a kolinerg idegvégződéseken felszabaduló acetil- kolin hatást. A következőkben olyan módszereket ismertetünk, amelyek kardioszelektív antimuszkarinikumok értékelésére alkalmasak. In vivo módszerek Az alkalmazott módszerekkel az antimuszkarin hatás szelektivitását akartuk meghatározni. Az in vitro vizsgálatok alapján kiválasztott anyagoknál megvizsgáltuk 1. Mi-/M2-szelektivitásukat patkányon, és 2. nyálelválasztást gátló hatásukat patkányon 3. az acetil-kolin tengerimalacok húgyhólyagjára, hörgőire és szívfrekvenciájára kifejtett hatásának gátlását. 1. M\-/Mi-szelektivitás patkányon Az alkalmazott módszert Hammer és Giachetti írták le [Life Sciences, 31, 2991-2998 (1982)]. Az anyag növekvő dózisainak intravénás befecskendezése után 5 perccel vagy a jobboldali vagust ingereltük elektromosan (frekvencia: 25 Hz, pulzusszélesség: 2 ms, ingerlési idő: 30 s, feszültség: szupramaximális), vagy hím THOM-patkányokr.ak 0,3 mg/kg McN-A-343-t fecskendeztünk be intravénásán. Meghatároztuk a vagusingerléssel kiváltott bradikardiát és az McN-A-343 által előidézett vérnyomás-emelkedést. Grafikusan ábrázoltuk az anyagoknak azt a dózisát, ami vagy a vagális bradikardiát (M2) vagy a vérnyomás-emelkedést (Mi) 50 %-kal csökkenti. Az eredmények a 2. táblázatban láthatók. 2. Nyálelválasztást gátló hatás patkányon Lavy és Mulder módszere szerint [Arc. Int Pharmacodyn., 178, 437-445, (1969)] 1,2 g/kg metánnal elaltatott hím THOM- patkányoknak az anyag növekvő dózisait adtuk be intravénásán. A nyálelválasztást 2 mg/kg pilokarpin szubkután adagolásával váltottuk ki. A nyálat itatóspapírral felszívtuk, és a nyálfolt területét 5 percenként meghatároztuk planimetriásan. Grafikusan ábrázoltuk az anyagnak azt a dózisát, ami a nyál térfogatát 50 %- kai csökkentette. Az eredmények a n. táblázatban láthatók. 3. Az acetil-kolin tengerimalac hólyagjára, hörgőire és szívfrekvenciájára kifejtett hatásának gátlása Elaltatott tengerimalacoknak a vizsgálandó anyag beadása után 5 perccel 10 pg/kg acetil-kolint fecskendeztünk be intravénásán és egyidejűleg intraarteriálisan is. Eközben a szívfrekvenciát az EKG testen kívüli vezetékével, a kilégzési ellenállást Konzett-Rössler szerint és a szabaddá tett húgyhólyag összehúzódását közvetlenül regisztráltuk. Az acetil-kolin hatás gátlásának meghatározására a vizsgált szervekre dózis-hatás görbéket vettünk fel és azokból meghatároztuk a -logED5o-értékeket. Az eredmények a ül. táblázatban láthatók. Az előbbi eljárás szerint megvizsgáltuk például a következő vegyületeket: A-5,ll-dihidro-ll-[6-(l-piperidinil)-l-oxo-hexil]-6H-pirido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on, és összehasonlító vegyületként B- ll-({2-[(N,N-dietil-amino)-etil]-l-piperidinil }-acetiI)-5,ll-dihidro-6H-pirido[2,3-b][l,4]benzodiaze-pin-6-on (lásd 4 550 107 számú USA-beli szabadalmi leírás), C- 5,11-dihidro-11 -[(4-metil-1 -piperazinil)-acetil]-6H-pirido[2,3-b][l,4]benzodiazepin-6-on (lásd 3 660 380 számú USA-beli szabadalmi leírás), és D-atropin. /. táblázat In vitro receptorkötődési vizsgálatok Eredmények: Receptorkötődési vizsgálatok IC50 (nM/1) Anyag Agykéreg Szív A 60 10 B 1200 140 C 100 1500 C 2 4 Az előbbi táblázat adatai bizonyítják, hogy az új, (I) általános képletű vegyületek megkülönböztetik a különböző szövetek muszkarinreceptorait. Ez a szívpreparátumok vizsgálatánál kapott, az agykéreg preparátumok hasonló értékeivel összehasonlítva jelentősen alacsonyabb IC50-értékekből következik. II. táblázat Mi-IM2-szelektivitás és nyálelválasztást gátló hatás patkányon Eredmények: Anyag-logED50 Szív (M/kg) Vérnyomás Nyálképződés A 7,75 6,42 6,65 B 6,42 5,63 5,00 C 5,60 6,94 6,22 D 7,94 7,34 7,60 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
