203256. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a kammunocin nevű új antibiotikum, és hatóanyagként e vegyületet tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 203 256 B 2 A fenti eredmények azt mutatják, hogy a kammunocin immunszupresszív hatással rendelkezik, és fenti tulajdonsága következtében immunszuppresszív gyógyászati készítmények hatóanyagaként például a szervátültetéseknél használható. A kammunocint farmakológiai tulajdonságai alkalmassá teszik gyógyszerkészítmények hatóanyagként való alkalmazására. A találmány tárgya tehát eljárás hatóanyagként kammunocint tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására, amely gyógyászati készítmények a hatóanyag mellett szokásos, általánosan használt segéd- és/vagy hordozóanyagokat tartalmaznak. A találmány szerinti eljárással előállított gyógyászati készítmények antibiotikus és/vagy immunszupresszív hatással rendelkeznek. A találmányt közelebbről - a korlátozás széndéka nélkül - az alábbi példákkal kívánjuk ismertetni. 1. példa Streptomyces Y-84,36210 törzs izolálása talajból a)Az izolálásra használt tápközegek előállítása 1. Táp közeg: glükóz l,0g glicerin i,0g L-arginin 0,3 g k2hpo4 0,3 g MgSO47H20 0,2 g NaCl 0,3 g élesztőkivonat 0,2 g Fe2(S04)3 10,0 mg CuS045H20 1 mg ZnS047H20 1 mg MnS047H20 1 mg agar 15,0 g desztillált víz 1 liter pH 6,5 2. Tápközeg: glükóz 2,0 g L-aszparagin 1.0 g k2hpo4 0,5 g MgS047H20 0,5 g talajkivonat (talajminta forralásával és szűrésével előállítva) 200 ml agar 15, Og desztillált víz 800 ml PH 8,0 3. Tápközeg: keményítő 10,0g kazein 0,3 g kno3 2,0 g NaCL 2,0 g k2hpo4 2,0 g MgS047jj20 0,05 g CaC03 0,02 g FeS04 10,01g agar 15,0 g desztillált víz 1 liter PH 7,2-7,5 A tápközegeket 121 °C-on 30 percen keresztül sterilezzük. A sterilizált tápközeget 45 °C-ra hagyjuk hűlni, majd Petri-csészébe töltjük és hagyjuk megszilárdulni. b) Talajszuszpenzió előállítása 1 g talajt 1 órán keresztül 110 °C-on melegítünk forró levegős kemencében. A lehűlés után a talajt desztillált vízben szuszpendáljuk, és alaposan összerázzuk. A talajt leülepedni hagyjuk, és a felülúszót használjuk az egyes fent megadott izolációs tápközegek beoltására. c) Tápközeg beoltása A fenti táptalajokból 50 ml tartalmazó Petri-csészékre 1 ml talajszuszpenziót oltunk. d) Streptomyces Y-84,36 210 izolálása A beoltott Petri-csészéket 37 °C-on 10 napon keresztül inkubáljuk, majd a szaporodó mikroorganizmusok közül izoláljuk a Streptomyces Y-84,36210 törzset. 2. példa Streptomyces Y-84,36210 tenyésztése a kammunocin fermentálása céljából A Streptomyces Y-84,36210 törzset az alábbi öszszetételű élesztő-maláta-agaron tenyésztjük; malátakivonat 10,0 g élesztőkivonat 4,0 g glükóz 4,0 g agar 15,0g desztillált víz 1 liter pH 7,0 A tápközeget kémcsövekbe mérjük, és 30 percen keresztül 121 °C-on sterilezzük. A kémcsöveket ferde helyzetben lehűtve ferde agart kapunk. A ferde agart a tenyészettel beoltjuk, és 10-15 napon keresztül 28 °C- on inkubáljuk, ezalatt jó növekedés és spóraképződés figyelhető meg. A ferde agárról desztillált vízzel nyert spóraszuszpenziót 5 db, egyenként 100 ml oltó-tápközeget tartalmazó 500 ml-es lombik, vagy egy, 1 liter oltóközeget tartalmazó 5 literes szívópalack beoltására használjuk. Az oltó-tápközeg összetétele: glükóz 15,0 g szójababliszt 15,0 kukoricalekvár 5,0 g CaC03 2,0 g NaCl 5,0 g desztillált víz 1 liter PH 6,5 A fenti tápközeget 100 ml-enként 500 ml-es Erlen - meyer-lombikokba, vagy 1 literenként 5 literes szívópalackokba mérjük, és 30 percen keresztül 120 °C-on sterilezzük. A lombikokat vagy palackokat lehűtjük, és a spóraszuszpenzióval beoltjuk, majd 72 órán keresztül 27 ± 1 °C-on rotációs rázógépen (240 fordulat/perc, 3,8 cm kitérés) rázatjuk. Az így kapott tenyészetet két, 10 liter oltó-tenyészetet tartalmazó 15 literes üvegfermentor beoltására használjuk, 8-10 térfogat% menynyiségben. A fermentálást 27 ± 1 °C-on, 180-200 fordu-6 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 6
