203256. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a kammunocin nevű új antibiotikum, és hatóanyagként e vegyületet tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 203 256 B 2 A találmány tárgya eljárás a kammun odrinak nevezett új antibiotikum előállítására a Streptomyces Y- 84,36210 (a német törzsgyűjteményben 1987.12.23- án DSM 4329 számon letétbe helyezett) törzs, valamint variánsai és mutánsai fermentálásával, valamint eljárás a hatóanyagként kammunocint tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. A Streptomyces Y-84,36210 törzset egy Pune-nál (Maharashtra, India) gyűjtött földmintából izoláltuk. A HIL Y-84,36210 törzs mutánsait és variánsait ismert módon, mutagének - például N-metü-N’-nitrozo-guanidin vagy ultraibolya sugárzás - alkalmazásával állítjuk elő. A Str. Y-84,36210 törzs az Actinomycetales rendbe, a Streptomycetaceae családba és a Streptomyces nemzetségbe tartozik. A Str. Y-84,36210 törzset új törzsnek tekintjük, mivel egyes morfológiai, tenyésztési és fiziológiai tulajdonságaiban az ismert törzsektől különbözik, amint azt az alábbiakban ismertetjük. Másik oka, ami miatt ezt a törzset új törzsnek tartjuk, az, hogy ez a törzs az alábbiakban jellemzett, kammunocinnak nevezett új antibiotikum-komplexet képes termelni, amely eljárás a találmány tárgyát képezi. A kammunocin - amint azt alább részletesen bizonyítjuk - egy peptid-antibiotikum, ami azonban a többi ismert peptid-antibiotikumtól -például aktinomicintól, viridogrizeintől, valinomicintől, kinomicintől, ciklosporintól, polimixintól vagy amfomicintől - különbözik. A többi ismert peptid- vagy peptidtartalmú antibiotikummal ellentétben a kammunocin legalább kb. 10 mmól kalciumion jelenlétét igényli ahhoz, hegy antibakteriális hatást fejtsen ki. Ezáltal ez az új antibiotikum jelentősen különbözik a többi ismert antibiotikumtól, például amfomicintől, glumamicintől, zaomicintől vagy az A 21978 C-komplextől -, amelyek antibiotikus hatásuk kifejtéséhez kevesebb, csak 1,0 mmól kalciumion jelenlétét igénylik Az amfomicin, gl um amicin és zaomicin a gyűrűs lipopeptid-antibiotikumok közé tartoznak, amelyeket a „CRC-Handbook of Antibiotic Compounds” [IV. kötet, 1. rész, 313-327. oldal, Janos Berdy (szerző) CRC Press, Boca Raton, Florida (1980)] irodalmi helyen ismertettek Egy 21978 C-komplexet - ami szintén gyűrűs lipopeptid-antibiotikum - a J. Antibiotics 40,761 — 777 (1987) irodalmi helyen írtak le. A találmány szerinti eljárás értelmében az új, kammunocin nevű antibiotikum-komplexet úgy állítjuk elő, hogy a Streptomyces Y-84,36210 törzset vagy annak egy variánsát vagy mutánsát aerob körülmények között, 18 és 37 °C közötti hőmérséklet-tartományban, szén- és nitrogénforrást, valamint ásványi anyagokat tartalmazó vizes tápközegben, előnyösen 6 és 9 közötti pH-tartományban tenyésztjük majd az antibiotikum-komplexet a tápközegből kinyerjük A találmány szerinti eljárással előállított új antibiotikum in vitro számos Gram-pozitív mikroorganizmus ellen hatásos, de csak kalciumionok jelenlétében, valamint immunmoduláló hatással is rendelkezik fenti tulajdonságai következtében gyógyszerkészítmények hatóanyagaként a humán gyógyászat területén használható. A találmány szerinti eljárásban használt Str. Y- 84,36210 törzset talajból izoláltuk, mintegy 6,5 és 8,5 közötti pH-jú tápoldat ismert módon való alkalmazásával. A mikroorganizmusok talajból való izolálására felhasznált tápoldatok szén- és nitrogénforrásból, szervetlen tápsókból és szilárdítóanyagokból állnak Szénforrásként előnyösen például glükózt, keményítőket, dextrint, glicerint, szacharózt vagy melaszt használhatunk A nitrogénforrás előnyösen pepton, élesztőkivonat, marhahúskivonat, malátakivonat, kazein vagy aminosavak például arginin vagy aszparigin lehet. Szervetlen tápsóként például előnyösen nátrium-, kálium-, magnézium-vagy kalcium-foszfátokat vagy -szulfátokat használhatunk A szilárdítóanyag például agar lehet A találmány szerinti eljárással izolált mikroorganizmusok elágazó szubsztrátmicéliumokból színtelen légmicéliumokat növesztenek A légmicéliumokon spirál alakú spóraláncok képződnek A spirálok nyitottak Gyakoriak a rövid, RA-szakaszt (laza, nyitott kacs, Retinaculum apertum) képviselő spóraláncok is. Sem örvény-, sem ascospora-képződés nem tapasztalható. Az érett spóraláncok lánconként 30-50 spórából állnak. A mikroorganizmus tulajdonságait különféle táptalajokon való tenyésztés esetén az alábbiakban ismertetjük (vesd össze Oxoid-Handbuch 1972, 2. kiadás, kiadó: Oxoid Limited, London, Anglia; vagy Difco Manual, 9. kiadás 1977, kiadó: Difco Laboratories Detroit, Michigan, USA). 1. Élesztőkivonat-malátakivonat-agar tenyészet: jó, redős, száraz légmicélium: jó, poros, enyhén kékesszürke hátoldal: fekete-bíbor oldható pigment: barna-bíbor 2. Zabliszt-agar tenyészet: bőséges, sima, száraz légmicélium: bőséges, poros, halványszürke hátoldal: sötétbarna-bíbor oldható pigment: barna-bíbor 3. Szervetlen só-keményítő-agar tenyészet: bőséges, kiemelkedő, száraz légmicélium: jó, poros, világos kékesszürke hátoldal: sötét feketésibolya oldható pigment: vüágos mályvaszínű 4. Glicerin-aszparagin-agar tenyészet: jó, kiemelkedő, száraz légmicélium: jó, poros, szürkésrózsaszín hátoldal: fekete-bíbor oldható pigment: világos bíborbama 5. Pepton-élesztőkivonat-vas-agar tenyészet: jó, redős, nedves légmicélium: - nincs hátoldal: gyengén sárga oldható pigment: gyengén barna 6. Tirozin-agar tenyészet: bőséges, redős, száraz légmicélium: bőséges, poros, gyengén szürkéskék hátoldal: sötét feketésibolya oldható pigment: gyengén bamásibolya 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
