203255. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hibrid interferonok előállítására
1 HU 203 255 B 2 (4414150 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) és specifikus aktivitása primer borjúvesesej - tekre 1,85-10® E/mg, illetve humán magzati bőr sejtekre (HEF=human embryonic foreskin; vezikuláris stomatitis vírussal fertőzött sejtek) 2,45-10® E/mg. A LyIFN-a-3 rokonságban van (de nem azonos vele) a humán leukocita LeIF-aD interferonnal (4414150 sz. amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) és specifikus aktivitása borjúsejtekre és HEF-sejtekre (lásd fent) 1,32-10® E/mg, illetve 3.7-106 EAng. A LyEFN-a-3-nak ezenkívül jobb a hőstabüitása és kisebb az antiproliferativ aktivitása, mint a LyIFN-a-2- nek. A találmány különösen olyan hibrid interferon polipeptidek előállítási eljárására vonatkozik, amelyek aminosavszekvenciája kettő-négy olyan al-székvenciából tevődik össze, melyek az aminosavak azonosságát és számát illetően megfelelnek a LyIFN-a-2 és LyEFN-a-3 humán limfoblasztoid interferon al-szekvenciáinak. Az eljárásra az jellemző, hogy prokarióta vagy élesztő gazdasejteket transzformálunk egy hibrid vektorral, amely egy promoterből és egy DNS-szekvenciából áll - amely egy hibrid interferon polipeptidet kódol és ez a polipeptid a következők egyike: polipeptid, melynek aminosav szekvenciája a LyIFN-a-2 1-150 aminosavából és a LyIFN-a-3 151-166 aminosavából áll; polipeptid, melynek aminosav szekvenciája a LyIFN-a-2 1-92 aminosavából, a LyIFN-a-3 93- 150 aminosavából és a LyIFN-a-2 151-166 aminosavából áll; polipeptid, melynek aminosav szekvenciája a LyIFN-a- 1-60 aminosavából, a LyIFN-a-3 61-92 aminosavából, a LyDFN-a-2 vagy a LyEFN-a-3 93-150 aminosavából és a LyIFN-a-2 vagy LyEFN-a-3 151 -166 aminosavából áll. A DNS-szekvenciát a promoter határozza meg. A vektor DNS-t tenyésztjük, a hibrid interferont elkülönítjük és kívánt esetben, gyógyszerkészítmény előállítására a kapott hibrid interferont gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggal és/vagy adalékanyaggal keverjük össze. Még részletesebben, a találmány a következő hibrid interferonok előállítására vonatkozik: CYS ASP LEU PRO GLN THR HIS SER LEU GLY ASN ARG ARG ALA LEU ILE LEU LEU ALA GLN MET ARG ARG ELE SER PRO PHE SER CYS LEU LYS ASP ARG HIS ASP PHE GLU PHE PRO GLN GLU GLU PHE ASP ASP LYS GLN PHE GLN LYS ALA GLN ALA ILE SER VAL LEU HIS GLU MET ILE GLN GLN THR PHE ASN LEU PHE SER THR LYS ASP SER SER ALA ALA LEU ASP GLU THR LEU LEÜ ASP GLU PHE TYR ILE GLU LEU ASP GLN GLN LEU ASP ASP LEU GLU SER CYS VAL MET GLN GLU VAL GLY VAL ILE GLU SER PRO LEU MET TYR GLU ASP SER ILE LEU ALA VAL ARG LYS TYR PHE GLN ARG ELE THR LEU TYR LEU THR GLU LYS LYS TYR SER SER CYS ALA TRP GLU VAL VAL ARG ALA GLU ILE MET ARG SER LEU SER LEU SER THR ASN LEU GLN GLU ARG LEU ARG ARG LYS GLU - az (I) szerkezetű ,3 j B2D3B4” hibrid interferon, CYS ASP LEU PRO GLN THR HIS SER LEU GLY ASN ARG ARG ALA LEU ILE LEU LEU ALA GLN MET ARG ARG ILE SER PRO PHE SER CYS LEU LYS ASP ARG HIS ASP PHE GLU PHE PRO GLN GLU GLU PHE ASP ASP LYS GLN PHE GLN LYS ALA GLN ALA ILE SER VAL LEU HIS GLU MET ILE GLN GLN THR PHE ASN LEU PHE SER THR LYS ASP SER SER ALA ALA LEU ASP GLU THR LEU LEU ASP GLU PHE TYR ILE GLU LEU ASP GLN GLN LEU ASN ASP LEU GLU ALA CYS VAL MET GLN GLU GLU ARG VAL GLY GLU THR PRO LEU MET ASN ALA ASP SER ILE LEU ALA VAL LYS LYS TYR PHE ARG ARG ELE THR LEU TYR LEU THR GLU LYS LYS TYR SER PRO CYS ALA TRP GLU VAL VAL ARG ALA GLU ILE MET ARG SER PHE SER LEU SER ILE ASN LEU GLN LYS ARG LEU LYS SER LYS GLU - az (II) szerkezetű ,3 j D2B3D4” hibrid interferon, CYS ASP LEU PRO GLN THR HIS SER LEU GLY ASN ARG ARG ALA LEU ILE LEU LEU ALA GLN MET ARG ARG ILE SER PRO PHE SER CYS LEU LYS ASP ARG HIS ASP PHE GLU PHE PRO GLN GLU GLU PHE ASP ASP LYS GLN PHE GLN LYS ALA GLN ALA ILE SER VAL LEU HIS GLU MET ILE GLN GLN ILE PHE ASN LEU PHE THR THR LYS ASP SER SER ALA ALA TRP ASP GLU ASP LEU LEU ASP LYS PHE CYS THR GLU LEU TYR GLN GLN LEU ASN ASP LEU GLU SER CYS VAL MET GLN GLU VAL GLY VAL ILE GLU SER PRO LEU MET TYR GLU ASP SER ILE LEU ALA VAL ARG LYS TYR PHE GLN ARG ILE THR LEU TYR LEU THR GLU LYS LYS TYR SER SER CYS ALA TRP GLU VAL VAL ARG ALA GLU ILE MET ARG SER LEU SER LEU SER THR ASN LEU GLN GLU ARG LEU ARG ARG LYS GLU - az (HI) szerkezetű hibrid interferon, CYS ASP LEU PRO GLN THR HIS SER LEU GLY ASN ARG ARG ALA LEU ILE LEU LEU ALA GLN MET ARG ARG ILE SER PRO PHE SER CYS LEU LYS ASP ARG HIS ASP PHE GLU PHE PRO GLN GLU GLU PHE ASP ASP LYS GLN PHE GLN LYS ALA GLN ALA ILE SER VAL LEU HIS GLU MET ILE GLN GLN ILE PHE ASN LEU PHE THR THR LYS ASP SER SER ALA ALA TRP ASP GLU ASP LEU LEU ASP LYS PHE CYS THR GLU LEU TYR GLN GLN LEU ASN ASP LEU GLU ALA CYS VAL MET GLN GLU GLU ARG VAL GLY GLU THR PRO LEU MET ASN ALA ASP SER ILE LEU ALA VAL LYS LYS TYR PHE ARG ARG ILE THR LEU TYR LEU THR GLU LYS LYS TYR SER PRO CYS ALA TRP GLU VAL VAL ARG ALA GLU ILE MET ARG SER PHE SER LEU SER ILE ASN LEU GLN LYS ARG LEU LYS SER LYS GLU 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
