203221. lajstromszámú szabadalom • Eljárás diamidok szelektív amidinálására
1 HU 203 221 B 2 2. példa N oc-terc.butoxi -karbonil-N0 ,N°-dietil-(R)homoarginin (DOC-Deh) előállítása A) 104 g (569 mmól) (R)-lizin-hidrokloridhoz annyi 10%-os vizes nátrium-hidroxidot adunk, hogy az oldat pH-ja 10,65 legyen. Az oldatot jégfürdőn lehűtjük, és az 1. példa A) része szerint készített N^N-dietü-formamidin-szulfonsav oldatot adunk hozzá cseppenként, élénk keverés közben, 2 óra alatt. A beadagolás alatt a pH-t 10,65 ± 0,05 értéken tartjuk 20%-os vizes nátrium-hidroxid oldat hozzáadásával. A teljes beadagolás után az oldatot keverés közben hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni, és szobahőmérsékleten egy éjszakán át keverjük, majd az így oldat alakjában kapott reakcióelegyet lehűtjük 0 °C-ra és 1000 cm3 dioxánt adunk hozzá, és cseppenként, keverés közben beadagoljuk 200 g (915 mmól) di(terc.butil)-dikarbonát 200 cm3 dioxánnal készült oldatát. Az elegyet szobahőmérsékleten 3 órát keverjük, mialatt a pH-t 10,0 ±0,3 értéken tartjuk 10%-os vizes nátrium-hidroxid oldat hozzáadásával. Az oldatot ezután megszűrjük, a szüredéket metanollal mossuk, a mosófolyadékokat egyesítjük a szűrlettel, és a kapott oldatot fele térfogatra bepároljuk. Az oldatot kétszer 100 cm3 etüacetáttal extraháljuk, 10%-os vizes sósavval 6,4 pH- ra savanyítjuk, és ismét extraháljuk kétszer 100 cm3 etil-acetáttal. Az így kapott vizes oldatot szárazra pároljuk, és a maradékot minimális mennyiségű etanolban 50 °C-on feloldjuk, majd leszűrjük. Az oldathoz 600 g szilikagélt adunk, és szárazra pároljuk. A szilárd anyagot acetonitrüben ázó, 2 kg szüikagéllel töltött oszlopra visszük, majd egymás után 2 dm3 acetonitrülel, 8 dm3 95:5 arányú 8 dm3 90:10 arányú, 8 dm3 85:15 arányú, végül 16 dm3 80:20 arányú acetonitril/víz eleggyel eluáljuk. A tiszta BOC-Dehet tartalmazó frakciókat (szilikagélen 80:20 acetonitril/víz eleggyel végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat alapján) egyesítjük, szárazra pároljuk, meleg etanolban újra feloldjuk, szűrjük, bepároljuk, éterrel trituráljuk, végül vákuumban szárítjuk. így 160 g tiszta BOC-Deh-et kapunk, amelynek olvadáspontja 89-91 °C. B) Mindenben a jelen példa A) részében leírtakat követjük, azzal a különbséggel, hogy (S)-omitin-bidrokloriddal helyettesítjük az (R)-lizin-hidrokloridot. így Na-terc.butoxi-karbonü-NG,NG’-dietil-(S)-arginint kapunk, amelynek infravörös elnyelési sávja van 3200 és 1690 cm-f-nél. C) Mindenben a jelen példa A) részében leírtakat követjük, azzal a különbséggel, hogy az N,N dietil-formamidin-szulfonsav oldata helyett N-fenil-formamidin-szulfonsav oldatot használunk. így Na-terc.butoxi-karbonü-N^-fenü-ÍRj-homoarginint kapunk [m/s (MH+)=365J. 3. példa N-[Na-(l-etoxi-karbonil-3-oxo-3-fenilpropil)-L-(NG,NG -dietü-homoarginü)]-L-prolin előállítása 400 mg benzil-N-[Na-(l-etoxi-karboml-3-oxo-3- fenil-propil)-L-(NG,NG-dietil-homo-arginil)]-L-prolinátot feloldunk 15 cm3, 1,6% tömény kénsavat tartalmazó ece(.savban. Hozzáadunk 100 mg 10% palládiumot a felületén tartalmazó szenet. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten, atmoszferikus nyomáson egymásfél óráig hidrogénezzük, majd Celite-en átszűrjük, és 0 °C-on híg ammónium-hidroxiddal 3-4 pH-ig semlegesítjük. A szűrletet gradiens-elucióval Amberlite XAD oszlopon engedjük át, az eluenst víztől etanolig változtatva. A megfelelő frakciók betöményítése után mintegy 200 mg olajat kapunk. Az olajat tovább tisztítjuk fordított fázisú, preparatív nagynyomású folyadékkromatográf iával, 2,5 x 100 cm-es Lichroprep RP- 18 (20-40 pm-es szemcsék, Merck gyártmány) oszlopon 80:20 acetonitril/víz eluenssel (0,03 M ammónium-acetátban, pH 7 mellett), 17 cm3/min sebességgel, így az egyik izomerből 80 mg-ot, a másik izomerből 40 mg-ot kapunk. A vegyületek fenil-propü csoport kapcsolódására nézve helyzetizomerek (az l.C-atom aszimmetriacentrum!), és felhasználhatók akár racém, akár szétválaszott formában. Ugyanüyen módon, ha szokásos elszappanosítási lépést is beiktatunk, a megfelelő dikarbonsavakhoz jutunk. 4. példa (S)-2-{(S)-N-[(S)-l -karboxi-5-N -dietü-guanidino-pentü-alanü}-1,2,3,4-tetrahidro-izokinolin-3-kar-bonsav előállítása A) A korábban idézett 12401, 65301 vagy 79022 számú európai közzétételi irat módszerével előállított (S)-2-[(S)-1 -karboxi-5-amino-pentü)-alanü]-1,2,3,4 -tetrahidro-izokinolin-3-karbonsavból 11,4 mmólt tartalmazó vizes oldat pH-ját 10,3-ra állítjuk be szilárd nátrium-hidroxid hozzáadásával. 1 g (5,5 mmól) N,N -dietil formamidin-szulfonsavat adunk egyszerre hozzá, keverés közben, majd a pH-t 20%-os vizes nátrium-hidroxid oldattal 10,7-re állítjuk be. Hozzáadunk további 4,6 g (25,5 mmól) N,N-dietil-formamidin szulfonsavat kis részletekben, 30 óra alatt, és szükség esetén 20%-os vizes nátrium-hidroxiddal a pH-t 10,6 és 10,9 között tartjuk. Amikor a kiindulási peptid teljesen felhasználódott (amit vékonyrétegkromatográfiával mutatunk ki), a reakcióelegyet jégecettel 4,5 pH-ra savanyítjuk, és a kapott oldatot Lichoprep Cl 8-cal töltött, fordítottfázisú, preparatív folyadékkromatográfiás oszlopra visszük, és tisztítás céljából acetonitril és vizes 0,05 M ammonium -acetát (pH 4,5) elegyével eluáljuk. A tisztított guanidin-peptidet (olvadáspontja 140-150 °C) a megfelelő oszlopfrakciókból (amelyeket TLC-vel vagy HPLC-vel ellenőrzünk) az e területen jártasak által ismert, szokásos eljárásokkal nyerjük ki. B) 4,94 g (27,4 mmól) N,N -dietü-formamidin-szulfonsavat egy adagban hozzáadjuk 14,65 g (30,5 mmól) benzü-(S)-2-{(S)-N-[(S)-l-metoxi-karbonil-5-amino-pentil-alanil}-l,2,3,4-tetrahidro-izokinolin-3- karboxflát (az előzőekben hivatkozott 12401,65301 és 79022 számú európai közzétételi irat módszerével ké-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 8
