203131. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új 1,12-dihidroxi-1,6,12,17-tetraaza-di-ciklodokozán-2,5,13,16-tetron és az ezt a vegyületet hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 203 131 B 2 A találmány tárgya eljárás az új 1,12-dihidroxi- 1,6,12,17-tetraaza-ciklodokozán-2,5,13,16-tetron és ezt a vegyületet hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. Az (I) képlettel jellemezhető vegyületet a továbbiakban a Bisucaberin fantázianév alatt fogjuk említeni. Először mi kezdtünk mikroorganizmusok által termelt, tumorelleni hatású anyagokat kutatni és kifejleszteni, és sikerült is néhány gyógyászatiig hatásos vegyületet találni, így a belomicin A és B vegyületeket [Umezawa, H. és munkatársai: I. Antibiot., 19A, 200 (1966)], valamint az aclacinomicint [Oki, T. és munkatársai: I. Antibiot., 30, 683 (1977)]. Az eddig ismert, a tumorsejtek szaporodásának gátlására képes vegyületeknek azonban hátrányosan nagy a toxicitásuk. Felismertük, hogy az Anteromonas genuszhoz tartozó mikroorganizmusok olyan új anyagot képesek előállítani, amelynek tumor elleni hatása van, különösen makrofág jelenlétében, ugyanakkor csekély a toxicitása. A fentiek alapján a találmány tárgya eljárás az (I) képletű Bisucaberin előállítására. A találmány szerinti eljárás lényege az, hogy az Alteromonas haloplanktis fajhoz tartozó és Bisucaberint termelni képes valamelyik mikroorganizmust, célszerűen az Alteromonas haloplanktis SB-1123 mikroorganizmust tenyésztjük, majd a Bisucaberin-t a fermentléből elkülönítjük. A Bisucaberin fizikokémiai tulajdonságai a következők: (a) Külső megjelenés: színtelen kristályok (b) Olvadáspont: 190 °C (bomlik) (c) Ibolyántúli abszorpciós spektrum: tanax (e) - 215 nm (5740) matanolban, 215 nm (5700) 0,1 n sósavoldat és metanol elegyében (d) Molekulatömeg: m/Z * 401 (MH+) SIMS-nél (szekunder ion tömegspektrometria) m/Z -401 (MH+) EIMS-nél (elektron ion tömegspektrometria) (e) Összegképlet: C18H32N4O6 (f) Elemzési eredmények: számított: C - 54,00% H - 8,00% N = 14,00% O = 24,00%; talált C - 53,69% H ~ 7,97% N - 13,20% O - 25,14%. (g) Infravörös abszorpciós spektrum: lásd az 1. ábrát (h) Proton-NMR-spektrum: lásd a 2. ábrát (i) 13C-NMR-spektrum: lásd a 3. ábrát (j) Oldékonyság: oldható dimetil-szulfoxidban, gyengén oldódik etanolban és rosszul oldódik vagy oldhatatlan vízben (k) Színreakciók: pozitív molibdén-kénsav reakcióban, tolidin-reakcióban és vas(III)-klorid-reakcióban, negatív ninhidrin- reakcióban (l) Vékonyrétegkromatográfia szilikagélen (a Merck cég 5715 számú terméke): Rf - 0,52 kloroform és metanol 90:10 térfogatarányú elegyével Rf - 0,38 kloroform és metanol 92:8 térfogatarányú elegyével (m) Nagyfeszültségű papírelektroforézis (3000 V, 20 perc): Rm - 0,0 hangyasav, ecetsav és víz 1:3:36 térfogatarányú elegyével, relatív mozgékonyságként megadva, az alanin mozgékonyságát 1,0-nak véve. Az ismert anyagok egyike sem mutatja a fentiekben felsorolt jellemzőket, így tehát a Bisucaberin-t új anyagnak kell tekinteni. Miként említettük, a találmány szerinti eljárás során az Alteromonas genuszhoz tartozó, Bisucaberin-t termelő mikroorganizmus tenyésztésével kapott fermentléből különítjük el a Bisucaberin-t. A Bisucaberin-t termelő mikroorganizmusokra példaképpen az Alteromonas haloplanktis SB-1123 törzset említhetjük. Ezt a törzset mi különítettük el talajmintából, amelyet Japánban az Aomori Prefektúrában mélytengeri régióban az altalajból különítettünk el. Ennek a törzsnek a mikrobiológiai jellemzői a következők: (a) Morfológiai jellemzők: 1) a sejtek alakja és dimenziói: rúd alakú sejtek, 0,5-0,8 pm*l,5-2,0 pm 2) mobilitás: mozgékony 3) spórák: nincsenek 4) Gram-féle festés: negatív (b) Tenyésztési jellemzők különböző táptalajokon: 1) húsleves-agar lemezes táptalaj: nincs növekedés 2) Z-médium-agar lemezes táptalajon: közepes növekedés, körkörös, lapostól konvexig, teljes, lágy, nedves-lumineszcens, átlátszó, halványsárga (Z-médium: 7,2 pH-jú tengervíz, amely 0,5% polipeptont és 0,1% élesztő extraktumot tartalmaz) 3) húsleves-agar ferde táptalajon: nincs növekedés 4) Z-médium-agar ferde táptalajon: közepes növekedés, némileg szóródó, nedves-lumineszcens, vajszerűen halványsárga 5) húsleves-folyékony táptalajon: nincs növekedés 6) húsleves-tengervíz folyékony táptalajon: közepes növekedés 7) húsleves-zselatin „stáb” táptalajon: nincs változás 8) húsleves-tengervíz-zselatin „stáb” táptalajon: elfolyósodás (c) Fiziológiai jellemzők: 1) nitrátok redukálása: negatív 2) denitrifikációs reakció: negatív 3) MR-teszt: negatív 4) VP-teszt: negatív 5) hidrogén-szulfid termelése: negatív 6) keményítő hidrolizálása: negatív 7) pigmentek termelése: nem termel vízoldható pigmenteket 8) oxidáz: pozitív 9) kataláz: pozitív 10) növekedési tartományok: hőmérséklet: jó növekedés 10 °C és 34 °C között (optimális tar5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2
