202921. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán tumor nekrózis faktort kódoló DNS, továbbá annak alkalmazásával a fenti faktornak megfelelő polipeptid, és hatóanyagként egy fenti polipeptidet tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 202 921 B 2 SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás az (Y)p-(X)n-(B)m-A (I) általános képletu, humán tumor nekrózis faktor po-Thr Pro Ser Asp Lys Val Alá Asn Pro Gin Gin Trp Leu Asn Arg Leu Alá Asn Gly Val Gin Leu Val Val Pro Leu lie Tyr Ser Gin Gin Gly Gys Pro Ser Thr His Thr Ile Ser Tyr Gin Thr Lys Val Ile Lys Ser Pro Cys Glu Gly Alá Glu Alá Pro Ile Tyr Leu Gly Gin Lys Gly Asp Arg Asn Arg Pro Asp Tyr Ser Gly Gin Val Tyr Leu képlett! polipeptid, amelyb<51 egy vagy több aminosav hiányozhat, vagy amelyben egy vagy több aminosav más aminosavval lehet helyettesítve, de a homológia mértéke legalább 95%; B jelentése Ser-Ser-Ser-Arg (Ib) képletu peptid, amelyből 1-3 aminosav hiányozhat, X jelentése az érett TNF-ben nem szereplő, teljes vagy részleges prekurzor-szekvencia, Y jelentése Met és m, n és p értéke 1 vagy 0 -, azzal jellemezve, hogy (i) humán makrofágokat indukálószer(ek)kel együtt tenyésztünk, (ii) a makrofágokból elválasztjuk a humán tumor nekrózis faktor poliA mRNS-t tartalmazó frakciót, (iii) a mRNS-ből egyszálú cDNS-t készítünk, reverz Ser Thr Glu Ser Met Leu Alá Glu Glu Ala Gly Gly Pro Gin Gly Phe Leu Ser Leu Phe Alá Gly Alá Thr Thr His Phe Gly Val He Glu Phe Pro Arg Asp Pro Leu Alá Gin Alá képletu polipeptid -, azzal jellemezve, hogy a megfelelő cDNS-eket klónozzuk. (Elsőbbsége: 1984. 03. 06.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás az olyan (Y)p-(X)n-(B)m-A a) általános képleti! aminosavszekvenciát kódoló DNS, vagy a 3’-végen egy terminális kodont tartalmazó fenti bázisszekvencia előállítására, ahol a képletben lipeptidet kódoló DNS, vagy a 3’-végen egy terminációs kodont tartalmazó fenti bázisszekvencia előállítására - a képletben A jelentése Pro Val Alá His Val Alá Glu Gly Alá Leu Arg Alá Asn Alá Leu Glu Leu Arg Asp Asn Ser Glu Gly Leu Tyr Val Leu Phe Lys Gly Thr His Val Leu Leu Arg Ile Alá Val Ser Asn Leu Leu Ser Alá Gin Arg Glu Thr Pro Lys Pro Trp Tyr Glu Gly Val Phe Gin Leu Leu Ser Alá Glu Ile Leu Asp Phe Alá Glu Phe Gly Ile Ile Alá transzkriptáz alkalmazásával, majd azt kettős szálú cDNS-sé alakítjuk, (iv) a kettős szálú cDNS-t egy vektorba illesztjük, (v) a rekombináns vektort Escherichia coliba vive azt transzformáljuk, és egy cDNS génállományt állítunk elő, (vi) kiválasztjuk a hINF-et kódoló kiónokat és (vii) i génállományból klónozzuk a humán tumor nekrózis faktort kódoló cDNS-t. (Elsőbbsége: 1984. 03. 06.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás az (Y)p-(X)n-(B)m-A (I) általános képletu aminosavszekvenciát kódoló DNS, vagy a 3’-végen egy terminációs kodont tartalmazó fenti bázisszekvencia előállítására - a képletben A, B, Y, m, n és p jelentése az 1. igénypont tárgyi körében megadott, és X jelentése Ile Arg Asp Val Glu Leu Pro Lys Lys Thr Ser Arg Arg Cys Leu Ser Phe Leu Ile Val Leu Phe Cys Leu Leu Gly Pro Gin Arg Glu Leu Ser Leu Ile Ser Val Arg A jelentése az 1. igénypontban megadott (la) képletu polipeptid, B jelentése az 1. igénypontban megadott (Ib) képletu peptid, Yésp jelentése az 1. igénypontban megadott, X jelentése a 2. igénypontban megadott (Ic) képletu polipeptid, és més n értéke 1, 5 25 30 35 40 55 60 31
