202921. lajstromszámú szabadalom • Eljárás humán tumor nekrózis faktort kódoló DNS, továbbá annak alkalmazásával a fenti faktornak megfelelő polipeptid, és hatóanyagként egy fenti polipeptidet tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 202 921 B 2 6. táblázat (folytatás) 130 Glu Ly s Leu Leu ArglAsp Asn Gin Leu Val Val Pro Thr |Asp Asn Gin Leu Val Val Pro 140 Ser Glu Ala Asp Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Ser Gin Gly Leu Tyr Leu Ile Tyr Ser Gin 150 180 Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Asn Leu Leu Ser Ala Ile Lys Ser Pro Cys Gin His Arg Glu Thr Pro Glu Arg Glu Thr Pro Glu Gly Glu Ala Glu Ala Glu “T9TJ Ala Pro 200 Lys Pro Met Ala Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr Leu Gly Trp Tyr Glu Pro Ile Tyr Leu Gly 2 10 Gly Val Phe Gin Leu Glu Lys Gly Asp Arg Gly Val Phe Gin Leu Glu Lys Gly Asp Arg 220 Leu Ser Leu Ser Ala rGhT ThrlGlu Ile Val Asn Asn Arg Gin Pro Pro Asp Glu Tyr Tyr TW Leu Asp Leu Asp Phe Ala Glu Ser Gly Gin Val Tyr Leu Ala Glu Ser Gly Gin Val Tyr Phe Gly Ile Ile Ala Leu Phe Gly Ile Ile Ala Leu A bekeretezett részek homológ szakaszokat jelentenek -----jelentése: egy aminosav hiányzik A fenti homológiákat és a nyúl plazma TNF meghatározott N-terminális és C-terminális aminosavszekvenciáit (3. referenciapélda) figyelembe véve megállapítható, hogy a humán TNF cDNS a humán TNF 233 aminosavból álló prekurzor polipeptidjét kódolja, és a biológiailag aktív humán TNF polipeptid olyan polipeptid, amely prekurzorának C-terminális végétól számított 155 aminosavból álló szekvenciának felel meg. A biológiailag aktív humán TNF polipeptidet olyan bázisszekvencia kódolja, amely olyan (I) általános képletű polipeptidnek felel meg, ahol A jelentése (la) képletű aminosavszekvencia, B jelentése (Ib) képletű aminosavszekvencia, és m értéke 1, n és p értéke 0. A humán TNF prekurzor polipeptidet olyan bá- 55 zisszekvencia kódolja, amely olyan (I) általános képletű polipeptidnek felel meg, ahol A jelentése (la) képletű aminosavszekvencia, B jelentése (Ib) képletű aminosavszekvencia, X jelentése (Ic) képletű aminosavszekvencia, m, n és p értéke 1, és Y jelentése Met. 60 A bázisszekvenciában és aminosavszekvenciában megfigyelhető nagy mértékű homológia arra utal, hogy a humán és nyúl TNF-ek filogenetikusán ugyanabból a génből származnak, és arra enged következtetni, hogy a közös régiók jelentős része(i) olyan szekvenciát jelentenek, amely a biológiai hatás kifejeződéséhez szükséges. Azonban a biológiailag aktív humán TNF polipeptid immunológiailag nem ad keresztreakciót a nyúl plazma TNF-fel, mint az alább látható. Valószínűleg a biológiailag aktív humán TNF polipeptid teljes aminosavszekvenciája nem minden esetben szükséges a hatás megmutatkozásához, és egy részben módosított humán TNF polipeptid is hatásos lehet abban az esetben, ha a biológiailag aktív TNF polipeptid aktív helyeit tartalmazza. [II-l] A találmány humán tumor nekrózis faktor polipeptid, vagy egy azt tartalmazó polipeptid, vagy annak fő része(i), vagy humán tumor nekrózis faktorhoz hasonló anyag, és annak fő része(i) előállítására is vo-45 50 13
