202884. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tripeptid-származékok, és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
1 HU 202 884 B 2 N-ftaloil-D-glutaminsavanhidridet. Az elegyet szobahőmérsékleten 2 órán keresztül keverjük. A reakcióelegyhez etil-acetátot adunk és az elegyet híg sósavoldattal, majd vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, és szárítjuk. Az oldószert elpárologtatjuk és a maradékot kis mennyiségű etil-acetátból kristályosítjuk. A kristályokat szűréssel összegyűjtjük, dietil-éterrel mossuk és szárítjuk. 13,1 g (2S,3aS7aS)-l-(N-ftaloil-y-D-glutamil)-oktahidro-lH-indol-2-karbonsavat kapunk, olvadáspontja 194-198 °C. A kapott vegyületet 200 ml etanolban oldjuk, és 6.13 g hidrazin- monohidrátot adunk hozzá. Az elegyet egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd 60 ml vizet adunk hozzá. Az oldat pH-ját 12 n sósavoldattal 4—5-re állítjuk, és a csapadékot szűréssel eltávolítjuk. Az anyalúgot koncentráljuk. A maradékot HP-20 (Mitsubishi Chemical Co., Ltd.) töltetű oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot vízzel mossuk és 70%-os metanollal eluáljuk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat csökkentett nyomáson koncentráljuk. 6.13 g (2S,3aS,7aS)-l-(y-D-glutamil)-oktahidro-lH- indol-2-karbonsavat kapunk, olvadáspontja 191— 192 °C. 1,8 g fenti vegyületet és 1,28 g nátrium-karbonátot 40 ml acetonitril és 30 ml víz elegyében oldunk. Az oldatot -10 °C-ra hűtjük, és keverés közben hozzáadunk 2,1 g N6-(benzil-oxi-karbonil)-L-lizin-N-karbonsavanhidridet. Az elegyet -10 °C-on 2 órán keresztül keverjük. A reakcióelegyet két fázisra választjuk szét. A vizes fázist hideg acetonitrillel mossuk, és hozzáadunk 200 ml etanolt. A csapadékot szűréssel eltávolítjuk. Az anyalúgot koncentráljuk és CHP20P töltetű oszlopon kromatografáljuk, az eluálást 0%-»60% gradiensű acetonitril-víz eleggyel végezzük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 1,9 g (2S,3aS,7aS)-[N6-(benzil-oxi-karbonil)-L-lizil-y-D-glutamil]-oktahidro-lH-indol-2- -karbonsavat kapunk. A fenti terméket 30 ml etanolban oldjuk, hozzáadunk 0,9 g ammónium-formiátot és 0,5 g 10% fémet tartalmazó szénhordozós palládiumkatalizátort. Az elegyet szobahőmérsékleten egy éjszakán keresztül keverjük. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk és az anyalúgot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot CHP20P töltetű oszlopon kromatografáljuk, az eluálást 0%—»30% gradiensű acetonitril-víz eleggyel végezzük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot liofilizálva 1,05 g (2S,3aS,7aS)-l-(L-lizil-y-D -glitam üyoktahütD-lH -±idoL2-karbonsavat kapunk, rxl°= -5 A' p20 ). 1,0 g fenti terméket és 0,46 g nátrium-karbonátot 10 ml tetrahidrofurán és 30 ml víz elegyében oldunk, és erőteljes keverés és jeges hűtés közben hozzáadunk 0,39 g nikotinoil-klorid-hidrogén-kloridot. Az elegyet 2 órán keresztül továbbkeverjük. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson koncentráljuk és pH-ját lúg sósavoldattal 2-3-ra állítjuk. Az oldatot CHP20P töltetű oszlopon kromatografáljuk, az eluálást 0%-»60% gradiensű acetonitril-víz eleggyel végezzük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat csökkentett nyomáson szárazra párolva és liofilizálva 0,15 g cím szerinti vegyületet kapunk. c) Eljárás 5.0 g D-glutaminsav és 7,1 g nátrium-karbonát elegyét 170 ml víz és 200 ml acetonitril elegyében oldjuk, és -10 °C-on keverés közben hozzáadjuk 11 g N6-(benzil-oxi-karbonil)-L-lizin-N2-karbonsavanhidrid acetonitriles oldatát. A reakcióelegyet -10 °C-on 2 órán keresztül továbbkeverjük. A vizes fázist hideg acetonitrillel mossuk, semlegesítjük és csökkentett nyomáson koncentráljuk. A maradékot CHP20P töltetű oszlopon kromatografálva tisztítjuk, az eluálást 0%—>50% gradiensű acetonitril-víz eleggyel végezzük, és híg alkoholból átkristályosítjuk. 6,3 g N6-(benzil-oxi-karbonil)L-lizil-D-glutaminsavat kapunk, olvadáspontja 149— 150 °C. 6.0 g fent kapott terméket és 3,0 g nátrium-karbonátot 100 ml víz és 40 ml tetrahidrofurán elegyében oldunk, és keverés és jeges hűtés közben hozzáadunk 3,2 g N-(nikotinoil-oxi)-szukcinimidet tetrahidrofuránban oldva. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2 órán keresztül keverjük. Az elegyet semlegesítjük és csökkentett nyomáson koncentráljuk. A maradék oldat pH-ját 2-re állítjuk és CHP20P töltetű oszlopon kromatografáljuk, az eluálást 0%—>60% gradiensű acetonitril-víz eleggyel végezzük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 4,8 g N2-nikotinoil-N6-(benzil- oxi-karbonil)-L-lizil-D-glutaminsavat kapunk. 4.0 g fent kapott vegyületet 100 ml ecetsavanhidridben 2 órán keresztül keverünk, majd alacsony hőmérsékleten, csökkentett nyomáson szárazra pároljuk az elegyet. A maradékot 50 ml metilén- kloridban oldjuk. Az oldatot vízzel mossuk és szárítjuk, majd az oldószert elpárologtatjuk. 3,5 g durván tisztított N2- nikotinoil-N6-(benzil-oxi-karbonil)-L-lizil-D-glutamin-savanhidridet kapunk. 3,5 g fent kapott vegyületet adunk 1,2 g (2S,3aS,7aS)-oktahidro-lH-indol-2-karbonsav 15 ml piridinnel készült oldatához, és az elegyet szobahőmérsékleten 2 órán keresztül keverjük. A reakcióelegyet csökkentett nyomáson, szobahőmérsékleten szárazra pároljuk. A maradékot vízben oldjuk, és az oldat pH-ját 2-re állítjuk. Az oldatot CHP20P töltetű oszlopon kromatografáljuk, az eluálást 0%—>60% gradiensű acetonitril-víz eleggyel végezzük. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 1,3 g (2S,3aS,7aS)-l-[N2-nikotinoil-N6-(benzil-oxi-karbonil)-L-lizil-y-D-glutamil]-oktahidro-lH-indol-2-karbonsavat kapunk. A fent kapott vegyületet 25 ml etanolban oldjuk, és hozzáadunk 1,2 g ammónium-formiátot és 0,5 g 10% fémet tartalmazó szénhordozós palládiumkatalizátort. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 3 órán keresztül keverjük. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk és az anyalúgot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot CHP20P töltetű oszlopon kromatografálva tisztítjuk, az eluálást 0%—>60% gradiensű acetonitril-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 14
