202553. lajstromszámú szabadalom • Eljárás diamino-monokarbonsavból álló izopolipeptidek és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, valamint poliizolizint tartalmazó növényvédőszer
HU 202553B gokat alkalmazzuk, ilyenek például a tejcukor, magnézium-sztearát, szacharóz, talkum, sztearinsav, zselatin, agar, pektin, tragakant, kolloid kovasav, kukoricakeményítő, alginsav és hasonlók. Kúpok készítéséhez előnyösen kakaóvajat használunk. Növények kezelését célszerűen úgy végezzük, hogy a találmány szerinti vegyületekből szokásos adalékanyagokkal, pl. szilárd vagy folyékony hordozókkal — előnyösen kaolinnal, talkummal, hígított alkohollal — és/vagy egyéb segédanyaggal, pl. nedvesítőanyaggal — előnyösen Tween 20-szal — szilárd vagy folyékony készítményeket állítunk elő, amelyek a hatóanyagot 1-40 tömeg%-ban tartalmazzák. A készítményekből a hatóanyagra nézve 1 - 500 ppm, előnyösen 5-500 ppm koncentrációjú oldatot vagy szuszpenziót készítünk, és azt a szokásos módon juttatjuk ki célszerűen 0,5-50 g/ha mennyiségben. Találmányunkat az alábbi példákkal szemléltetjük: 1. példa Poli(E-L-lizin) hidrogén-bromidos sója a) Na-benziloxikarbonü-L-lizin-p-nitrofenilészter sósavas sója 10 g Na-benziloxikarbonil-(Ne-terc-butüoxikarbonü)-L-lizin-p-nitrofenilésztert oldunk 40 ml trifluorecetsavban és mólekvivalens mennyiségű 2 N sósavas etilacetátot adunk hozzá. Egy óra állás után az oldatot térfogatának mintegy a felére betöményítjük, és éter hozzáadásával kristályosítjuk. Termék: 8,3 g (96,06%); Op.: 83-86 °C. TLC: Rf- 0,68 (n-butanol-jégecet-víz 4:1:1 v/v). b) Na-benziloxikarbonil-N^(N’“-benziloxikarbonil-N’e-terc- butüoxikarbonil-L-lizil)-L-lizin-pnitrofenilészter 7,69 g (20 mmól) Na-benzüoxikarbonü-(NE- terc-butil-oxikarbonil)-L-lizint absz. acetonitrilben oldunk és hidegen mólekvivalens mennyiségű trietilamint (2,8 ml), majd klórszénsav-izobutilésztert (2,8 ml) csepegtetünk hozzá. Aktiválás után hozzáadunk 9 g la. szerint készült sót és vele párhuzamosan mólekvivalens mennyiségű trietílamin (2,8 ml) acetonitriles oldatát. A terméket a reakcióelegy sósavas vízre öntésével nyerjük. Etilacetátpetroléterből kristályosítjuk. Hozam: 12,9 g (89,02%); Op.: 128-131 °C. Analízis: ONp tartalom 99,8%. TLC: Rf- 0,64 (EtOAc-ciklohexán 3:1) Rf- 0,91 (n-BuOH-AcOH-ví 4:1:1) HPLC tR= 8,8 perc (k’= 2,2) oszlop: ODS-Hypersil-6 (125x4 mm) eluens: MeOH-CH3CN-0,02 mól NaOAc pH- 4,0 40:30:30 v/v sebesség 1 ml/p. detektálás: 254 nm (UV) c) Na-benzüoxikarbonü-N(N’a-benziloxikarbonil-L-lizü)-L-lizin-p-nitrofenilészter sósavas sója 10,5 g Na-benzüoxikarbonil-Ne(N’“-benzüoxikarbonü-N’e-terc- butiloxikarbonü-L-lizil)-L-lizin-p-nitrofenüészterből la) szerint 10,25 g (98%) sót nyertünk. Op.: 109-113 ”C. TLC: Rf- 0,70 (n-BuOH-AcOH-H20 4:1:1). d) Ne-terc-butiloxikarbonü-tri(N“-benzüoxikarbonil-L-lizin)-p-nitrofenilészter 5,71 g (15 mmól) Na-benziloxikarbonil(Ne-terc-25 butüoxikarbonil)-L-lizinból lb) szerint acetonitrüben mólekvivalens mennyiségű trietilaminnal, klórszénsav-izobutilészterrel vegyes anhidridet készítünk. 10,5gNa-benziloxikarbonil-Ne(N,C£-benzüoxikarbonil-L-lizü)-L-lizin-p-nitrofenüészter sóját adjuk hozzá trietüamin bázis jelenlétében, lb) feldolgozás szerint 13,9 g terméket nyerünk. Acetonitrü-éterből kristályosítjuk. Op.: 145-150 °C. Analízis: ONp tartalom 99,6%, TLC: Rf= 0,98 (n-BuOHACOH-H2O 4:1:1); HPLC: tR= 18,2 perc, k’- 8,1 oszlop: ODS-Hypersil-6 (125x4 mm), eluens: Me- OH-CH3CN-0.02 mól NaOAc puffer (pH 4) 40:30:30 v/v, 1 ml/perc; detektálás: UV254 nm. e) Tri-(Na-benziloxikarbonil-L-lizin)-p-nitrofenil-észter sósavas sója 12,2 g ld) szerint készült észtert la) szerint kezelünk. 12,1 g (95,4%) sót kapunk. Op.: 108-125'C. TLC: Rf=0,71 (n-BuOHAcOH:H20 4:1:1). f) Poli(e-Na-benzüoxikarbonil-L-lizin) 23 g (24 mmól) tri(Na-benziloxikarbonil-L-lizin)-p-nitrofenilészter sósavas sóját 60 ml absz. dimetil-szulfoxidban 4,5 ml trietüamin jelenlétében kondenzáljuk teljes gélesedésig. Szódaoldatba öntéssel izoláljuk a polimert. Hozam: 16,8 g (89,6%). Analízis: Zco2 16,8% (számított) 16,3% (talált), [nsp]/c= 31,92 cnr/g (c= 4,95 g/1, düdórecetsav). g) Poli(e-L-lizin) hidrogén-bromidos sója 16 g védett polimert 100 ml trifluorecetsavban oldunk és 100 ml 4 n hidrogén-bromidos jégecetet adunk hozzá. A csapadékos oldat éterbe öntésével izoláljuk a végterméket. 14,7 g (91,6%). Analízis: Br 37,7% (számított) 36,8% (talált) A254 nm- 0, Papírkromatográfia: W1 23x62, eluens: n-BuOHAcOH-Pyr-H20 30:6:24:20. Hozam: védett monomertől a polimerig 36,82%, szabad lizinből indulva 18,85%. A kapott polimerek átlagos móltömege 5.500-20.300 közötti érték. h) Nyerstermék tisztítása A fenti g) pont szerinti 250 mg polimer vizes oldatát Sephadex G-50 (fine) oszlopon (80x4 cm) gélkromatografál juk. Eluensként desztillált vizet, vagy 0,9%-os NaCl oldatot vagy 0,1 n HCl-t használunk. 220 nm-nél detektáljuk az 1 ml-es frakciókat. így állítottuk elő az SZTP-15 jelű anyagot vizes eluálással: Mw-11600 D; [ct]2V 31,9° (c= 2; H2O); papírkromatográfiásan tiszta termék; Br-tartalom: 36,9 s% r értéke, vagyis a polimer tagszáma: 90 ± 2 i) Nyerstermék tisztítása A fenti g) pont szerinti 2 g poli(e-L-lizin).HBr-t oldunk 2 ml vízben, majd 20 ml alkoholt adunk hozzá. Digeráljuk, majd 80 ml éterrel kicsapjuk. Az étert kétszer cseréljük dekantálással. Egy éjjelen át hűtve tároljuk, majd szűrjük, éterrel mossuk, szárítjuk. A terméket 1,26 g (83%). Hozam: 57,7% akiindulási védett tripeptidre vonatkoztatva. így állítottuk elő az SZTP-14 jelű anyagunkat (Mw-12.700 D, [a]2 V +32,4“ (c- 2; H20) papírkromatográfiásan tiszta termék; polidiszperzitás: 3,7 (számátlag/sőlyátlag) Br-tartalom: 36,8 s% r értéke, vagyis a polimer tagszáma: 99 ± 2 A papírkromatográfiás vizsgálatok eredményei azt igazolták, hogy a példában leírtak szerint előállí-26 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
