202549. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 3'-azido-3'-dezoxi-timidin jód-125 izotóppal jelzett monojód-tirozin-metilészter származékainak előállítására
HU 202549B 95%-os etil-alkoholt, míg a (Dlb) vegyületnél előnyösen kloroformrmetanol 4:1 térfogatarányu elegyet alkalmazunk, az oldószer-front hossza célszerűen 16-18 cm. A foltok helyét a megszárított lemeznek a 254 nm hullámhosszúságú ultraibolya fénnyel történő megvilágításával mutat juk ki. A foltok azonosítása után a gélt a megjelölt helyen lekaparjuk a hordozó rétegről, és a (Ufa) vegyület esetében előnyösen etil-acetáttal, a (Dlb) vegyidet esetében előnyösen acetonnal szuszpendáljuk, majd a gélt üvegszűrőn kiszűrjük. A szűrletet ezután csökkentett — kb. 0,02 bar — nyomáson, célszerűen 30-40 °C hőmérsékleten oldószermentesítjük. A (Dia) köztitermék színtelen olaj, melyből etilalkohodal törzsoldatot készítünk, és ebből megfelelő térfogatot az előbbiek szerint szárazra párolva kiindulási anyagként használjuk a (Da) köztitermék szintézisére. A (Dlb) képletű köztitermék fehér kristályos anyag, amelyet dyen formában használunk kiindulási anyagként a (Db) köztitermék szintézisére. A (Da) köztiterméket a (Dia) vegyidéiből, míg a (Db) köztiterméket a (IDb) vegyületből mint kiindulási anyagokból állítjuk elő, előnyösen etd-acetát oldószerben, melyet a kiindulási anyagok 1 móljára számított 100-1000, előnyösen kb. 400-700 mólarányban alkalmazunk. A TME reagenst a kiindulási anyagok 1 móljára számított 1-3, előnyösen 2 mólarányban alkalmazzuk. Karbodiimid reagensként előnyösen EDCIHCl-t alkalmazunk, a kiindulási anyagok 1 móljára számított 1-3, előnyösen 1,5 mólarányban. A reakcióidő a reakció egyéb körülményeitől függően 1-50 óra, célszeren 20-24 óra körüli, a reakció hőmérséklete 10-60 °C, előnyösen 20 'C körüli. A reakció után a reakcióelegyet a (El) köztiterméknél leírt módon dolgozzuk fel, azzal az eltéréssel, hogy a vékonyréteg-kromatográfiás elválasztást 9:1 térfogatarányú kloroform:metanol oldószerelegyben végezzük. A (D) képletű köztitermékek fehér kristályos anyagok, melyekből etü-alkohodal törzsoldatot készítünk, és ebből megfelelő térfogatot az előbbiek szerint szárazra párolva kiindulási anyagként használunk az (I) képletű célanyagok szintézisére. Az (I) általános képletű céltermékek előádítása (II) általános képletű köztitermékek és 0,37- 370 MBq (10 mikrocurie — 10 mCi) radioaktivitású, előnyösen kb. 37 MBq (1 mCi) radioaktivitású hordozómentes nátrium-(r25I)jodid reakciójával történik vizes pufferben, előnyösen 7 körüli pH értékű foszfát puff erben, szobahőmérsékleten. A (H) általános képletű köztitermékeket a Na II móljára számított 1-100, előnyösen 20- 40 mólarányban alkalmazzuk. A reakcióhoz szükséges „pozitív jódot” az elegyhez feleslegben adott oxidálószerrel, előnyösen klóramin-T reagenssel generáljuk. A reakcióidő 10-600 másodperc, előnyösen 1 perc. A reakcióidőt úgy szabályozzuk, hogy a kívánt időpontban a reakcióelegyhez feleslegben alkalmas redukálószert, előnyösen nátriummetabiszulfitot adunk. A reakcióelegyből a kívánt célterméket vékonyrétegkromatográfiával választjuk el, a (II) képletű 3 kiindulási anyagokkal azonos módon. A radioaktív termékek helyét radiokromatogram szkennerrel kimutatjuk, és az inaktív (Ha) képletű kiindulási anyaghoz legközelebbi Rf értékű foltot 20%-os etilalkohollal, a (Dl) képletű vegyületeknél leírt módon leoldjuk. A másik lehetséges eljárásváltozat szerint — melynek alkalmazása különösen 1 mCi-nél nagyobb radioaktivitású reakcióelegyeknél indokolt — célszerűen egy hatékonyabb, gyorsabb és sugárvédelmi szempontból is előnyösebb nagynyomású folyadékkromatográfiát alkalmazunk. Ebben az esetben a jelzési reakcióelegyet ún. fordított fázisú szilikagél oszlopon izokratikusan kromatografáljuk víz:acetonitril:metanol oldószereleggyel. Az eluens radioaktivitását szcintillációs kristállyal összekapcsolt számlálóberendezéssel folyamatosan detektáljuk. A detektort célszerűen programozható frakciószedővel kapcsoljuk össze, amely a kívánt radioaktív csúcsokat tiszta frakciókként gyűjti össze. A találmány szerinti eljárás előnyeit a következőkben foglaljuk össze: Az eljárás az AZT alapmolekula piridin és dezoxiribóz gyűrűjét, azaz a „nukleozid magot” kémiailag lényegüeg változatlanul hagyja, ezáltal biztosítja a származékokban is az ezen funkciók által meghatározott immunaktivitás megőrzését. Az eljárás szerinti szintézis-lánc első lépése, vagyis az AZT alapmolekula átalakítása szabad karboxü csoporttal rendelkező származékokká /a (Dia), illetve (Dlb) képletű köztitermékek szintézise) olyan kétfunkciós szintetikus alapanyagokkal történik, amelyek az AZT C-5 funkciójával szelektíven reagálnak, ílymódon az egyéb funkciós csoportok átmeneti blokkolása elkerülhető. A találmány szerinti eljárás egyik kiemelkedő előnye, hogy a radioaktív jódatom beépítése a szintézis lánc utolsó lépésében történik, így a radioaktív műveletek száma és ennek megfelelően a sugárveszély is, a lehető legkisebb. A találmány szerinti főbb szintetikus lépések közel azonos reakciókörülményeket és feldolgozási műveleteket igényelnek, a kitermelés valamennyi folyamatnál kellően magas, és az egyes reakciók szokásos laboratóriumi körülmények között, normál nyomáson és hőmérsékleten mennek végbe. Az alkalmazot t eljárás szintézis-lépéseiben az oldószerek minősége és aránya, az egyes reagensek aránya, a reakcióidő és -hőmérséklet úgy optimalizálhatok, hogy számottevő mellékreakciók nélkül, jó kémiai és radiokémiái kitermeléssel állíthatók elő a kívánt közti- és céltermékek. Az alkalmazott kromatográfiás módszerek biztosítják egyfelől az egyes köztitermékek optimális tisztítását, másfelől a jód-125-tel jelzett célszermékeknek a jelzési reakcióban nagy feleslegben lévő inaktív kiindulási anyagoktól való hatékony elválasztását, amely alapkövetelmény a magas fajlagos aktivitás eléréséhez. Végül — bár nem tartozik közvetlenül a találmány tárgyköréhez —, de kiemeljük, hogy a találmány szerinti eljárással kapott egyes köztitermékek, nevezetesen a (Illa) és a (IHb) képletű vegyületek előnyösen alkalmazhatók az AZT radioimmun meghatározásában alkalmazott másik kulcsrea-4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
