202547. lajstromszámú szabadalom • Eljárás epi-podofillotoxin-glükozid-4'-foszfát-származékok és az ilyen hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
HU 202547B verővel keverjük és melegítjük, míg a szüárd részek majdnem teljesen feloldódnak. A kapott oldatot hagyjuk szobahőmérsékletre hűlni, és hozzáadunk 2,36 ml (13,5 mmól) N,N-diizoporpil-etiI-amint. Ezután az elegyet 0 ’C hőmérsékletre hűtjük, és egy fecskendő segítségével 30 másodperc alatt hozzáadunk 666 mg (4,34 mmól) foszforil-kloridot. Ezután hagyjuk az elegyet lassan, 2-3 óra alatt szobahőmérsékletre melegedni, és a reakcióelegyet további 63 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Utána a reakcióelegy 20 térfogat%-nyi részletét kivesszük, és dietil-aminnal kezeljük. A reakcióelegy többi részét 6,0 g (71,4 mmól) nátrium-hidrogénkarbonát 110 ml ionmentesített vízzel készült oldatával kezeljük. Az elegyet 80 percig szobahőmérsékleten keverjük, majd 20 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat, 125 ml ionmentesített víz és 350 ml etil-acetát kétfázisú elegye között megosztjuk. A szerves részt még egyszer 50 ml ionmentesített vízzel kirázzuk, az egyesített, vizes részeket 250 ml etü-acetáttal mossuk, majd a vizes részbe beoldódott szerves oldószerek eltávolítása céljából az elegyet 1 órán át 67 Pa nyomáson, szobahőmérsékleten tartjuk. Ezután a vizes elegyet felvisszük egy 4 cm átmérőjű és 15 cm hosszú oszlopra, amelyet Ci8 (oktadecü-szüán) szilikagéllel töltünk, a töltéshez metanolt használunk, majd a kész oszlopot vízzel hozzuk egyensúlyba. Miután az oszlopra felvittük a fenti vizes elegyet, az oszlopot először 175ml vízzel eluáljuk, üymódon eltávolítjuk a szervetlen sókat, majd ezután víz és metanol 4:1 arányú elegyével eluáljuk a terméket. A kapott frakciókról az oldószert 67 Pa nyomáson ledesztilláljuk, ily módon színtelen, szüárd anyag formájában 744 mg (hozam: 36%) tiszta, cím szerinti vegyületet kapunk. Eljárhatunk úgy is, hogy a frakciókat fagyasztva szárítjuk, üy módon nagyon habos, kis sűrűségű, szilárd anyag formájában kapjuk a tiszta, cím szerinti vegyületet. IR-spektrum (KBr): 3426, 1775, 1593, 1505, 1486, 1337, 1239, 1191, 1122, 1078, 1034, 983, 927,888,876,851,840,697,684,664,547 cm'1. 1 H-NMR-spektrum (360 MHz, D2O), delta: 6,93 (s, 1H), 6,59 (s, 1H), 6,27 (s, 2H), 5,93 (d, 2H), 5,09 (d, 1H, J - 2,8 Hz), 4,83 (q, 1H, J - 5,0 Hz), 4,68 (d, 1H, J - 7,9 Hz), 4,62 (d, 1H, J - 5,7 Hz), 4,47-4,35 (m, 2H), 4,24 (dd, 1H, J - 4,4 és 10,4 Hz), 3,64 (s, 6H), 3,68-3,52 (m, 3H), 3,44-3,30 (m, 3H), 3,17- 3,07 (m, 1H), 1,31 (d, 3H, J - 5,0 Hz). 13C-NMR-spektrum (90 MHz, D2O), delta: 178,5 151,8, 148,1, 146,1, 135,0, 132,6, 130,9, 127,4,109,9,109,5,107,4,101,3,100,4,99,6,79,2, 73,7, 72,7, 72,2, 69,1, 67,1, 65,4, 55,6, 42,8, 40,3, 37,5.18,8. 3IP-NMR-spektrum (146 MHz, D2O), delta: 3,79. Tömegspektrum (gyorsatom-ütköztetéses módszer): m/e - 713 (M+ + H). C29H3iNa20i6P: M+ - 712. Analízis a C29H3lNa201 óP képlet alapján: számított: C: 48,89, H: 4,39, Na: 6,45; talált*: C: 48,72, H: 4,56, Na: 6,56%. * - A Kari Fischer-féle meghatározás szerint talált 8,16% vízre átszámítva. 7 2. példa Etopozid-4’-tiofoszfát-dinátrium-só /(Vb) képletű vegyület/ 2,04 g (3,47 mmól) etopozid 175 ml vízmentes acetonitrillel készült szuszpenzióját mágneses keverővei keverjük és melegítjük, míg az oldatlan részek majdnem teljesen feloldódnak. A kapott oldatot hagyjuk szobahőmérsékletre hűlni, majd hozzáadunk 2,00 ml (11,5 mmól) N,N-diizopropü-etilamint. Ezután az elegyet 0 °C hőmérsékletre hűtjük, és egy fecskendő segítségével, 30 másodperc alatt hozzáadunk 0,720 g (4,17 mmól) tiofoszforil-kloridot. Ezt követően hagyjuk a reakcióelegyet lassan, 2-3 óra alatt szobahőmérsékletre melegedni, és további 16 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Utána az elegyet felmelegítjük 30-35 *C hőmérsékletre, és további 4 órán át ezen a hőmérsékleten tartjuk. Az ezután elvégzett vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat (futtató elegy: metanol és diklór-metán 5 : 95 arányú elegye) szerint a reakcióelegy fő összetevője egy olyan vegyület, amelynek Rf-értéke nagyobb, mint az etopozidé. A reakcióelegyet 7,4 g szüárdnátrium-hidrogén-karbonáttal kezeljük, majd hozzáadunk 100 ml ionmentesített vizet A vizes elegyet másfél órán át 28-35 "C hőmérsékleten, majd további 1,5 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Utána megosztjuk 200 ml ionmentesített víz, 30 ml telített, vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldat és 300 ml etü-acetát között. Ezután az 1. példában leírt módon dolgozzuk fel a reakcióelegyet, és a nyersterméket fordított fázisú szüikagélen kromatografáljuk. Ily módon színtelen, szilárd anyag formájában 1,03 g (hozam: 40,8%) tiszta, cím szerinti vegyületet kapunk. 'H-NMR-spektrum (360 MHz, D2O), delta: 6,93 (s, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,27 (s, 2H), 5,93 (d, 2H), 5,09 (d, 1H, J - 2,8 Hz), 4,83 (q, 1H, J - 5,0 Hz), 4,68 (d, 1H, J - 7,8 Hz), 4,63 (d, 1H, J - 5,7 Hz), 4,47-4,35 (m, 2H), 4,24 (dd, 1H, J - 4,3 és 10,5 Hz), 3,64 (s, 6H), 3,67-3,52 (m, 3H), 3,47-3,29 (m, 3H), 3,17- 3,07 (m, 1H), 1,31 (d, 3H, J - 5,0 Hz). Tömegspektrum (gyorsatom-ütköztetéses módszer): m/e - 728 (M+), 706 (M++H - Na). C29H31 Na2015PS: M+ - 728. 3. példa Etopozid-4’-difenil-foszfát /(TV) általános képletű vegyület, ahol R1 jelentése metilcsoport, R8 jelentése hidrogénatom, és R7 és R8 jelentése egyaránt fenilcsoport/ 10,50 g (17,84 mmól), foszfor-pentoxid felett 80 *C hőmérsékleten és 67 Pa nyomáson megszárított etopozid 450 ml vízmentes acetonitrillel készült szuszpenziójához mágneses keverővei keverve, fecskendő segítségével hozzáadunk először 4,20 ml (24,1 mmól) diizoporpil-etil-amint, majd ugyancsak fecskendő segítségével 2,00 ml (9,65 mmól) difenü-klór-foszfátot. Az elegyet 2 órán át 50 ‘C hőmérsékleten, nitrogén alatt keverjük, ezalatt az etopozid teljesen feloldódik. Ekkor az elegyhez hozzáadunk további 1,80 ml (8,68 mmól) difenil-klórfoszfátot, és a reakcióelegyet 72 órán át 45 'C hőmérsékleten tartjuk. Ezután további 0,75 ml (4,3 mmól) amin-bázist, és 0,80 ml (3,86 mmól) difenil-8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
