202499. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9-(acil-amino)-tetrahidroakridin-származékok és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 HU 202 499 B 2 1 .(hatástani) vizsgálati példa A Na+-függő, nagy affinitású kolinfelvételre kifejtett hatás AF64A anyaggal kezelt patkány hippocampusában Módszer Fischer és munkatársai módszere szerint (J. Pharm. Exper. Ther. 222,140 [1982]) AF64 vegyűletből AF64A-t készítünk, és a patkány mindkét agykamrájába, oldalanként 1,5 pl (1,5 nmól) mennyiséget fecskendezünk. Egy hét elmúltával az állatokat 10 lefejezzük és a hippocampust kiemeljük. Ezt 0,32 M szacharózoldattal homogenizáljuk, 10 percig lOOOxg sebességgel centrifugáljuk, a felülúszót további 20 percig 20000xg sebességgel centrifugáljuk, és így nyers szinaptoszomális frakciót kapunk. E frakciót a 15 hatóanyaggal 37 °C hőmérsékleten 30 percig inkubáljuk, majd 1 pM 3H-kolint adunk hozzá, és további 10 percig 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Kontroll készítése céljából a nyers szinaptoszomá- 5 lis frakciót 37 °C hőmérsékleten 30 percig inkubáljuk, majd 1 pM 3H-kolint adunk hozzá, és további 10 percig 37 °C-on inkubáljuk. Ekkor a reakciót leállítjuk úgy, hogy a keveréket Whatman GF/B szűrőn megszűrjük. A szűrőn maradó radioaktivitást folyadékszcintillációs számlálással határozzuk meg, & ezt tekintjük a magas affinitású kolinf elvétel mértékének. A fehérje mennyiséget Bradford eljárásával határozzuk meg (Anal. Biochemistry 72, 248 [1976]). Eredményeinket a 9. táblázatban foglaltuk össze. 9. táblázat Az arány javulása (százalékban, a kontrollal összehasonlítva) Példaszám 10“*M 10“7M io-*m 10"5M 1 20** 13** 28** 31** 15 3 13* 16* 11* 19* 21* 4 4 5 3 29* 5 14 12 19 16 17** 21 15 3-5 28-2 — 20 10 21* 23** 9 28* 21 10 11 19* 32** 18* 22 13* 16 10 30* 4 27 5 19* 25* 41* 9 35 2 26 15 27** 26 37 14 9 27** 34** 39** 39 5 8 16** 24* 40 8 18 14 20 3 41 5 5 18 46** 20 42 11 14 30* 29** 11 46 —8 11 28 13 27* 50 4 20* 35* 27-10 25
