202320. lajstromszámú szabadalom • Berendezés immunkémiai vizsgálatokhoz
7 HU 202 320 B 8 Ezt követően a 3 és 4 mikrotiter lemezeket lezártuk száraz térben a csonkokkal ellátott záróelemmel, ezek szilikongumiból készültek és 2,5 mm-nyire álltak ki; ezek a csonkok a mikrotiter lemezek tartóit légmentesen zárták le, a tárolás 1 hétig vagy 3 hónapig tartott, 18 *C hómérsékleten és atmoszférikus nyomáson. Az oldatból, amely pontosan ismert mennyiségben tartalmazott második immunkémiailag aktív anyagot, pufferoldatot és szacharózt, egy cseppentő pipettával 0,05 ml cseppeket juttatunk be szabadeséssel egy Dewar-palackba, ami 80 cm3 folyékony nitrogénnel volt feltöltve. A palack fenekén szilárd, közelítőleg gömb alakú fagyasztva szárított részecskék gyűltek össze. Ezeket a részecskéket használtuk fel a 2,3 és 4 mikrotiter lemezek tartóiba. A harmadik immunkémiailag aktív anyagokat tartalmazó részecskéket hasonló módon készítettük el. A vizsgálatokat a következő módon végeztük el. Miután bevittük a vizsgálat tárgyát képező közeget, ami a vizsgálandó anyagból pontosan ismert mennyiséget tartalmazott, 37 'C hőmérsékleten egy bizonyos ideig inkubáltunk, ezt követte a puffer oldatos öblítése és a detektálás. Amennyiben jelölésre enzimet (peroxidáz enzimet) használtunk, további inkubációs lépésre került sor, amelynek során a detektálást megelőzően egy peroxidtartalmú szubsztrátumot használtunk. A detektálást mindegyik példa esetében kolorímetríkus eljárással végeztük. Az 1., 4., 7. és 10. példákat, amelyekben a HBs Ag (hepatitis B felület antigén) meghatározása ment végbe, 5 hasonló módon foganatosítottuk, megjegyezve, hogy az 1. példánál a második immunkémiailag aktív anyagot tartalmazó cseppet, a 4., 7. és 10. példában pedig a második immunkémiailag aktív anyagot tartalmazó részecskéket használtuk. Az időtartam, ami után a vizsgáló latot elvégeztük, miután a részecskéket bejuttattuk a tartóba, változott Ugyanez vonatkozik a 2., 5., 8. és 11., valamint a 3., 6., 9. és 12. csoportokhoz tartozó példákra, amelyekben HCG (humán korio gonadotropin) és tesztoszteron került meghatározásra. Minden példa szerinti 15 vizsgálatot tízszer végeztünk el, az a mennyiség, ami az 1. táblázat utolsó oszlopában van feltüntetve, 10 meghatározás átlagértéke. Ahogy az eredményből kitűnik, a találmány szerinti készülékkel végzett meghatározások minősége ugyan- 20 az, mint az ismert készülékekkel végzett meghatározások. A találmány szerinti készülék még azzal a további előnnyel is rendelkezik, hogy annak a személynek, aki a meghatározásokat végzi, nem kell bejuttatnia pontosan ismert mennyiségben a második immunkémiailag 25 aktív anyagot a tartó(k)ba. 1. táblázat Példa mikrotiter első második izotópos a vizsgálat vizsgálati harmadik inkutalált lemez immunkémiailag jelölő típusa közeg immunbációs mennyiség aktív anyag anyag kémiailag idő aktív anyag 1. 1 M anti-HBs anti-HBs enzim szendvics 0,1 szérum N.A. 1 óra l,0mg/ml 2. 1 HCG anti-HCG aranyszol kompetitiv 0,1 ml vizelet N.A. 1 óra 1010IU/1 3. 1 anti-T anti-T festékanyag inhibíciós 0,1 ml PBS I-BSA cseppekben adagolva 2 óra 250 ml 4. 2 M anti-HBs anti-HBs enzim szendvics 0,1 ml szérum N.A. 1 óra l,0mg/ml 5. 2 HCG anti-HCG aranyszol kompetitiv 0,1 ml vizelet N.A. 1 óra 1012IU/1 6. 2 anti-T anti-T festékanyag inhibíció 0,1 ml PBS T-BSA 2 óra 252 mg/ml 7. 3 M anti-HBs anti-HBs enzim szendvics 0,1 ml szérum N.A. 1 óra l,0mg/ml 8. 3 HCG anti-HCG aranyszol kompetitiv 0,1 ml vizelet N.A. 1 óta 980 IU/1 9. 3 anti-T anti-T festékanyag inhibíció 1 ml PBS T-BSA 2 óra 245 mg/ml 10. 4 M anti-HBS anti-HBs enzim szendvics 0,1 ml szérum N.A. 1 óra 1,0 mg/ml 11. 4 HCG anti-HCG aranyszol kompetitiv 0,1 ml vizelet N.A. 1 óra 1013 IU/1 12. 4 anti-T anti-T festékanyag inhibíció 0,1 ml PBS T-BSA 2 óra 257 mg/ml PBS = foszfát-pufferes fiziológiai sóoldat hepatitis B felület antigén HBs = antitest (bárány) HBsAg ellen HCG = humán korio gonadotrofin anti-HCG = antitest (nyúl) T ellen HBsAg = T-BSA = számos T molekula szarvasmarha szérum albumin antimolekulához van kapcsolva N.A. = nem alkalmazható 5
