202259. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikroorganizmusok tenyésztésére szolgáló szilárd táptalaj előállítására
1 HU 202259 B 2 savamid gélt tápszubsztrátummal impregnáljuk. A szubsztrátum lehet például Hottinger-féle tipikus tápoldat vagy húspepton lé. Az impregnálás utána a táptalajt sterilizáljuk, szárítjuk és teszt-mikroorganizmussal beoltjuk. A találmány szerinti eljárással előállított szilárd táptalaj szerkezete szerkezete stabil, adhéziós tulajdonsága, rugalmassága jó, átlátszósága optimális és biztosítja a különböző fajtájú mikroorganizmusok, különösen a mozgékony formák tenyészeteinél a kolóniák stabilitását. A találmány szerinti eljárást a következő példákkal szemléltetjük. Összehasonlításképpen a mikroorganizmusokat olyan szilárd táptalajra oltottuk, amelyet a 3430316 sz. NSZK-beli közrebocsátási iratban leírtak szerint készítettünk. Ezen a táptalajon a 37 "C-on végzett inkubálás után folyadék izzadmány volt megfigyelhető, ami a teszt-tenyészetek növekedését károsan befolyásolta, nedves nyálkás, a szabályostól eltérő kolóniák képződtek. 1. példa A gél előállításához első lépésben, a következőkben leírt módszer szerint négy oldatot (jelük: A, B, C és D) készítünk 0,85 tömeg% nátrium-kloridot tartalmazó fiziológiás oldat felhasználásával (a komponensek mennyiségét 1000 ml oldatra számítva adjuk meg). 1. Az A jelű oldat előállítása 5 ml N,N’-tetrametil-etilén-diamint (TMED) oldunk fel 995 ml fiziológiás oldatban. 2. A B jelű oldat előállítása 0,742 g N.N’-metilén-bisz-akrilsavamidot (MBA) oldunk fel 500 ml fiziológiás oldatban, majd 60 °C hőmérsékletre melegítjük, 470 g akrilsavamidot (AA) adunk hozzá és az elegyet a teljes feloldódásig keverjük. A kapott oldatot szűrjük, majd fiziológiás oldattal 1000 ml-re egészítjük ki. 3. A C jelű oldat előállítása 1,78 g ammónium-peroxo-diszulfátot oldunk fel 1000 ml fiziológiás oldatban. 4. A D jelű oldat előállítása 100 g poli(vinil-alkohol)-t oldunk fel 900 ml fiziológiás oldatban. Az elkészített oldatokból állítjuk össze a reakcióelegyet. Az A, B, C, D jelű oldatokat a következő térfogatarányokat betartva keverjük össze: A:B:C:D-16:32:52:10 A reakcióelegyben az akrilsavamid és a poli(vinil-alkohol) (PVA) tömegaránya 15:1. A reakcióelegyet egy reaktorba töltjük, ahol lejátszódik a gyökös kopolimerizáció, amelynek eredményeként gél pelyhek képződnek. 60 perc eltelte után a gélt kivesszük a reaktorbői, fiziolóűgiás oldattal 1 órán keresztül öblítjük, majd 3,5-szeres tömegnővekedésig duzzasztjuk. Az előzőekben leírtak szerint előállított gélből szilárd tápőtalajt készítünk. A pelyheket folyékony tápszubsztrátumba - ebben az esetben húspepton lébe - helyezzük, és 2-3 órán keresztül 56 ’C hőmérsékleten állni hagyjuk. A táptalajt ezután 30 percig 120 °C hőmérsékletű gőzzel sterilizáljuk, termosztátban szárítjuk, majd 37 °C hőmérsékleten teszt-mikroorganizmussal beoltjuk. Az előállított szilárd táptalaj adhéziós tulajdonsága, rugalmassága, sűrűsége, átlátszósága jó és a mikroorganizmusokkal való beoltáskor az oltókacs nem sérti meg. Folyékony tápszubsztrátumként húspepton lét, teszt-mikroorganizmusként Staphylococcus aureus-t alkalmazunk. Az inokulátumok 37 *C hőmérsékletű, 24 órás inkubációja után tipikus, aranyszínű, sima peremű, kerek kolóniák fejlődnek ki. Mikroszkópos vizsgálattal ellenőrizzük a kultúra tipikus jellemzőit. A szilárd táptalajon nem jelentkezik folyadék izzadmány. A tenyészetet oltókaccsal teljesen le lehet választani. Az összehasonlító kísérletben nem-tipikus, nedves, nyálkás kolóniák képződnek, a pigmentképző képesség megmarad. 2. példa A reakcióelegy előállításához az 1. példában leírtak szerint elkészített A, B, C és D jelű oldatokat használjuk. Az oldatokat A:B;C:D-16:32:52:20 térfogatarányban keverjük össze és a polimerizációhoz a reaktorba töltjük. A reakcióelegyben az akrilsavamid és a PVA tömegaránya 15:2,0. Egy óra eltelte után a kapott gél pelyheket az 1. példában leírtak szerint kezeljük, de a duzzasztásnál a tömegnövekedés 5-szörös. A gélt az 1. példában leírtak szerint tápszubsztrátummal impregnáljuk. A szubsztrátum jelen esetben Hottinger-féle triptikus tápoldat, amely az aminocsoportokban 200 mg nitrogénatomot tartalmaz, a tesztmikroorganizmusp edig Bacillus pyocyaneus. A 37 'C hőmérsékletű inkubáció után kerek, lapos, váladékszerű kolóniák fejlődnek ki, tipikus, kékeszöld színű, oldahtó pigment képződésével együtt. Folyadék-kiizadás a szilárd táptalj felületén nem tapasztalható. A tenyészet nem hatol be a táptalajba, oltókaccsal teljesen leválasztható. Az összehasonlító kísérletben lapos, elmosódott, váladékszerű kolóniák fejlődnek, tipikus pigmentáicóval. 3. példa A reakcióelegy előállításához az 1. példában leírtak szerint elkészített A, C és D jelű oldatokat használjuk. A B jelű oldatot úgy készítjük, hogy 0,594 g N,N’metilén-bisz-akrilsavamidot oldunk fel 500 ml, 0,85 tömeg% nátrium-kloridot tartalmazó fiziológiás oldatban, majd 470 g akrilsavamidot adunk hozzá, és a megadott koncentrációjú fiziológiás oldattal 1000 ml-re egészítjük ki. Az oldatokat A:B:C:D-16:32:52:30 térfogatarányban keverjük össze, és a kopolimerizációhoz a reaktorban töltjük. A reakcióelegyben az akrilsavamid és a PVA tömegaránya 15:3,0. A kapott gélt az 1. példában leírtak szerint kezeljük, de a duzzasztásnál a tömegnövekedés 5-szőrös. A gélt az 1. példában leírtak szerint tápszubsztrátummal impregnáljuk. A szubsztrátum jelen esetben Hottinger-féle triptikus tápoldat, amely az aminocsoportokban 200 mg nitrogénatomot tartalmaz, a tesztmikroorganizmus pedig Escherichia coli 055. A 37 *C hőmérsékletű, 24 órás inkubáció után a tenyészet sima, enyhén domború, fénylő, sima peremű kolóniák formájában fejlődik ki. A tenyészet tipikus tulajdonságait a morfológiai és agglutinációs tulaj5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
