202119. lajstromszámú szabadalom • Adjuváns elegy, és eljárás az ezt tartalmazó vakcina előállítására
HU 202119B alkalmazott kémiai szerek közül példaként a formaldehidet, glutáraldehidet, ß-propiolaktont, etilén-imint és származékait említhetjük, vagy olyan vegyületeket, amelyek a patogén reakcióképes csoportjaival bifunkciós vagy többfunkciós módon képesek reagálni. A patogén dőlésére alkalmas fizikai eszközökre példaként az ultraibolya sugárzást, gamma-sugárzást, hő-sokkot és röntgensugárzást említjük. A fenti patogének antigén frakcióit a patogénekből kémiai vagy fizikai lebontási eljárásokkal állíthatjuk elő, majd a frakciókat kívánt esetben kromatográfiás eljárással, centrifugálással, vagy egyéb hasonló módon választhatjuk el. Általában kis móltömegű komponenseket kapunk, amelyeknek - noha kívánt esetben igen tiszták - immunogén aktivitásuk is igen gyakran alacsony. A patogénckből nyert kis móltömegű frakciókat kívánt esetben hordozóhoz - például görög kürtöscsiga hemocianinhoz vagy liposzomákhoz vagy más micelláris komplexekhez - kapcsolhatjuk, az immunogén sajátság fokozása céljából. A patogének immunogén frakciói alatt szintetikus antigéneket vagy hapténeket is értünk, amelyek a patogén természetes antigénjeinek utánzására használhatók. A fenti szintetikus antigéneket vagy hapténeket ismert módon, szerves kémiai szintetikus eljárásokkal állíthatjuk elő, vagy például polipeptidek esetén rekombináns DNS módszereket használhatunk. 3 A találmány szerinti eljárással előállított vakcinában az antigén koncentrációja általában 1 -95 v% lehet. Megjegyezzük, hogy a vakcina egyéb töltőanyagot, mint például vizet is tartalmazhat. 5 A találmány szerinti eljárással előállított vakcinák vagy egy patogén immunogén anyagát tartalmazzák (úgynevezett monovalens vakcina), vagy több patogénét (úgynevezett kombinált vakcina). Ä kombinált vakcinák például különböző vírusok, 10 vagy ugyanazon vírus különböző törzsei, vagy vírus/baktérium kombinációk, vagy különböző baktériumok immunogén anyagát tartalmazzák. A találmány szerinti adjuváns elegy hatékonyságát az 1 -6. példák, magát az adjuváns elegyek előál- 15 lítását a 7-9. példák szemléltetik. 1. Példa 10 egérből álló csoportokat intramuszkulárisan vakcinálunk inaktivált Pseudo-rabies vírust (PRV- 20 t) tartalmazó 0,1 ml adjuváns eleggyel (10ö TCIDso/ml; a TCID50 rövidítés jelentése: szövetkultúrát 50%-ban fertőző dózis; angolul: Tissue culture infective dose 50%). A vakcinálás után 8 és 16 héttel vérmintákat veszünk, és a szérum antitest-ti- 25 terét ELISA-módszerrel (részletesen ismertetve a GB 1 363 565 számú szabadalmi leírásban) meghatározzuk. Az eredményeket az 1. táblázatban ismertetjük. 4 7. Táblázat Csoport Adjuváns An ti test-válasz vakcinálás után száma 8 héttel 16 héttel 1. _ 10,9 ± 0,9a 9,9 ± 1,1 2. PluronicL 12 lb 11,4+2,1 11,1 ± 1,7 3. Carbopol 934c 14,0 ± 1,4 11,7 ±2,1 4. PluronicL 212b + + Carbopol 934° 15,1 ±0,8 14,0 ± 1,3 a) átlagosELISA-titer 2-es alapú logaritmus (log2), standard deviációval b) 4,8 vegyes% (vizes oldat) c) 0,15 vegyes% (vizes oldat). A blokkpolimer/akrilsavpolimer arány = 32:1. A mért eredmények azt bizonyítják, hogy a talál-Az 1. táblázat 2-es alapú logaritmusokat tártálmány szerinti adjuváns oldat alkalmazásával szignimáz. Az 1/A táblázat az eredményeket decimális fikánsan jobb eredményt lehet elérni (a mért adatóalakban tünteti fel a különbségek jobb érzékelhetőkát Student T-teszttel analizáltuk) (p 0,0026). sége végett. HA. Táblázat Csoport Adjuváns Antitest-válasz vakcinálás után száma 8 héttel 16 héttel 2. PluronicL 121 2702 (211,4) 16834 (214,0) 2195(2j['i) 3327 (2U,/) 3. Carbopol 934 219086 35120 (215,1) X552?40 16304 (214'”) 4. Keverék 3
