202104. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-karboxi-3,4-metiléndioxi-8-metoxi-fenantrént tartalmazó immunstimuláló hatású gyógyszerkészítmények előállítására
HU 202104B A találmány tárgya eljárás l-karboxi-3,4-metiléndioxi-8-metoxi-fenantrént tartalmazó immunstimuláló hatású gyógyszerkészítmények előállítására. Az l-karboxi-3,4-metiléndioxi-8-metoxi-fenantrén a J. Nat. Products 46, 507 (1983) közleményből ismert Éjiben leírják, hogy házinyúlnál 90 mgkg dózisban abortiv és egérnél 60 mg/kg dózisban implantációt gátló hatású. A közleményben leírtakból azonban immunstimuláló hatást nem lehetett feltételezni. Az arisztolochiasav (3,4-metiléndioxi-8-metoxi-10-nitro-l-fenantrénkarbonsav) és 8-helyzetben szubsztituálatlan származéka ismertek (J. Org. Chem. 30 3792-3800 (1965); Dtsch. Apoth. Ztg. 1978 /1962/). Fagocitózisserkentő és vírusellenes hatásuk alapján fertőzéses megbetegedések megelőzésére és kezelésére javasoltak. A gyógyhatást általános fertőzéseknél növelik, és eredményesen alkalmazhatók gennyesedések és kelések kezelésére. Nagyobb dózistartományokban végzett farmakológiái kísérleteknél azonban patkányok előgyomrán rövidesen sejtes elfajulás jött létre, ami az alkalmazást kérdésessé teszi. Az 1 -karboxi-3,4-metiléndioxi-8-metoxi-fenantrén, amelynek az arisztolochiasavtól eltérő, abortiv és implantációt gátló hatása ismert, még igen nagy dózisokban - a gyógyászatban szokásos 10 mg/kg dózisban sem malo-oszkóposan, sem szövettanilag nem mutatott hámszövet-hiperpláziát, és mutagén hatás sem volt észlelhető. Az l-karboxi-3,4-metiléndioxi-8-metoxi-fenantrént úgy állítják elő, hogy 6-bróm-piperonilbromidot trifenil-foszfinnal vízmentes közegben [(6-bróm-piperonil)-trifenil-foszfónium]-bromid dá reagáltatnak. Majd ezt 2-metoxi-benzaldehiddel erős bázis jelenlétében 2-bróm-4,5-metiléndioxi- 2’-metoxi-stilbénné kapcsolják. A stilben-bromidszármazékot ultraibolya fénnyel besugározva 1- bróm-3,4-metiléndioxi-8-metoxi-fenantrénné alakítják. Ebből az 1-karboxi-származékot alalkálidioxiddal kapják. A találmány szerinti gyógyszerkészítmények a hatóanyagból a gyófyszertechnológiában szokásosan alkalmazott eljárásokkal állíthatók elő. A találmány szerint előállított immunstimuláló hatású gyógyszerkészítmények a fertőzés elleni védekezés fokozására szolgálnak. így például jelentősen aktiválják a leukociták fagocitását. A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmények például a Mycobacteriumok vagy Pneumococcusok által okozott általános fertőzések kezelésénél, továbbá lokális fertőzések kezelésére használhatók. A találmány szerint előállított immunstimuláló hatású gyógyszerkészítmények akkor is használhatók, ha a fagocitózis gyengülése áll fenn, ami péládul kortikoszteroidok vagy citosztatikumok alkalmazása után lép fel. A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmények alkalmazásával a gyengült fagocitózis ismét normálizálható. A találmány szerint előállított gyógyszerkészítmények ezenkívül vírusellenes hatást is mutatnak. A találmány szerint előállított gyógyszerkészítményeket többek között makrofág-aktiváló hatásra is megvizsgáltuk. Paraméterként monocitáknak és 1 makrofágoknak az egerek hasüregében való stimulálását vettük. A monociták f okozott kemotaktikus bevándorlását a hasüregbe és a monoxiták differenciálódását fagocitózisra fokozott képességű mikrofágokká, célszerűen a kísérleti vegyület intraperitoneális alkalmazásával mutatjuk be. A stimulálás olyan folyamat, amely bizonyos időt vesz igénybe. A fagocitózis aktivitásának a vizsgálatát ezért mint szokásos farmakológiai modellt egereknek a találmány szerinti vegyületekkel végzett háromnapos előkezelése után végezzük. Egyes kísérleti csoportoknál az intraperitoneális sejtpopulációt közvetlenül a vegyület beadása után eltávoiítottuk, annak kimutatására, hogy megfigyelt stimulálás csak bizonyos inkubációs idő után lép fel. Kísérleti anyagok A vizsgálandó anyagot 0,5 mg/ml töménységben vízben feloldottuk, és ezt az oldatot szükség szerint hígítottuk. NH á,Cl-ttisz-puffer NH4CI 8,3 g/liter Trisz[trisz(hidroxi-metil)-amino-metán] 4,110 g/200 ml (pH=7,65) keverék 1 rész trisz + 9 rész NH4CI, 2 n sósavval 7,2 pH-értékre beállítva PBS/BSA 40,0gNaCl 1,0 g KC1 vízzel 51 ml-re feltöltve, 7,2gNa2HPC>4.2H20 pH-7,4 l,0gKH2PO4 + 0,2 g BSA (marha szérumalbumin, Sigma, No. A-9647) 100 ml PBS-re (foszfáttal pufferolt sóoldat). DMEM Dulbecco által módosított Eeagle tápoldat, L- glutaminnal, fenolvörös nélkül (Gibco, katszám 041-1885) + 5% FCS (magzati borjúszérum), illetve + 5% FCS+0,2% heparin FCS fetális (magzati) borjúszérum (Gibco, kát. szám: 011-6290) May-Grünwald-oldat módosított (Merck, Art. 1424) Ürüvér Nr.5,30.08.84., MPL Freiburg Antiszérum Anti-ürü-eritrocita szérum nyulakból, Nr.308. IKA 468/6-11 nap; 18.07.78, MPIFreiburg Kísérleti állatok A kísérleteket 18 hetes nőstény F1 hibrid egerekkel (Balb/cxC57B16) végeztük. Az állatokat a kísér-2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
