202064. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyomirtásra, Phomopsis convolvulus gomba spóratenyészet alkalmazásával és a gombatenyészet előállítására
HU 202064B 12 órán át megfelelő mennyiségű nedvességet tartalmazókörnyezetben kell tartania spórákkifejlődésének megindulásához, illetve ezt követően a növények fertőzésének kialakulásához. Kikelés előtti vagy kikelés utáni alkalmazásra granulátum formájú készítmények használhatók. A levélzet károsító granulátum készítmények kikelés előtti alkalmazását megnehezítik a talajban élő egyéb organizmusok. Ezért a kikelés előtt alkalmazott, gyomirtó gomba készítmények hatékonyságát nagymértékben meghatározza a készítmény előállítási eljárása. A gombák alkalmazása előnyösen levél permetezőszer formában történik. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott mikroorganizmusokat a következőkben ismertetésre kerülő eljárással tenyészthetjük. A gomba tenyészet hatásának elősegítésére, kezelésének, tárolásának és alkalmazásának megkönnyítésére a tenyészet kiszerelése előnyösen olyan készítmény formájában történik, amely ismert hordozó- vagy hígítóanyagot és előnyösen felületaktív anyagot és adott esetben egyéb adalékanyagot tartalmaz. Ezek az adalékanyagok elősegítik a készítmény növényhez tapadását, esőállóságát vagy megakadályozzák például a napfény hatására bekövetkező bomlását. Az üyen készítmények alkalmazása a hagyományos eljárásokkal történik például úgy, hogy a növényeket bepermetezzük vagy a talajt kezeljük a növény tényleges vagy várható előfordulási helyén. A találmányunk szerinti eljárásban alkalmazott, találmányunk szerinti növényvédőszer készítmények tehát készülhetnek úgy, hogy a gombatenyészetet valamilyen folyadékkal, paszta vagy gélszerű anyaggal vagy inert szilárd granulátummal vagy szemcsés hordozóanyaggal társítjuk. Anövényeklevélzetére való alkalmazásnál különösen előnyös a permetezés előtt vízzel hígított, nedvesíthető por vagy vizes szuszpenziók használata. A készítmények tartalmazhatnak emulgeálószereket, szuszpendálószereket és életképes tenyészet alkalmazása esetén a mikroorganizmusok életképességének fenntartására megfelelő tápanyagokat is. A Phomopsis convolvulus Ormeno telepek morfológiai jellemzőit a következőkben ismertetjük. A pelyhes burgonya dextróz agarban tenyésztett Phomopsis convolvulus telepeksűrű, bensőséges, fehér micéliumból állnak, a tenyészet alsó oldala színtelen, kis egyedi, párnaszerű szövetekből áll. Akonidiomata formája piknidikus, elkülönült, bemélyítve kiemelkedik, alakja a gömb formától félgömb formáig terjed, felépítése lapos, egy vagy több rekeszes. A textúra angularis átmérője 300 pjn-ig terjed, egy vagy több pórusból áll, a pórusnyflás szélessége 50 pzn-ig terjed. A piknidikus fal több, világosbarna, oldalról összenyomottsejtrétegből áll,amelyapórusok körül erőteljesen elszíneződik és meszesedik. A konidiogén sejtek átlátszóak, egyszerűek, fialidikusak, hosszúságuk 5 pm-ig terjed, közvetlenük a piknidikus üreg sejtburkolat legbelső rétegéből vagy az 1 -válaszfalú konidioforákból emelkednek ki. Az alfa-konidia átlátszó, hosszúkástól orsóellipszoidig terjedő formájú, a két végén többnyire két, nagy csepp formában végződik, ritkábban három csepp formát vesz fel, a közepén néha enyhén összeszűkül, 3 hosszúsága (10)11-12(15) pin; szélessége 3-4(5) pjn; hosszúságának és szélességének aránya 2,5- 3,0. A béta konidia páfrány formájú, a kúpos vég gyakran horgas, ritkán egyenes alakú; csak tenyészetbenfordulclő;hosszúsága 17-33 pin; szélessége 0,5-1,5 pin. A következő kísérletekben alkalmazott Phomopsis convolvulus IMI 312959 gombákat fertőzött mezei szulák sérült leveleiről gyűjtöttük a quebec állambeli Ste-Anne-de-Bellevue környékén. A fertőzött levélszövet 1 cni-es darabjait felszeleteljük, és felületüket 5 percen át sterilizáltuk. A sterilizálásra 1 térfogat%-os hipoklorit oldatot használtunk. A sterilizált levéldarabokat steril vízzel leöblítettük, és 5 percen át steril papíron szárítottuk, majd maláta agar extr aktumot (MEA) tartalmazó petri csészékbe tettük, és pH-ját 88 tömeg%-os laktonsawal 4,8-re állítottuk be. A tenyészeteket ezután laboratóriumi munkaasztalon kiegészítő megvilágítás nélkül 21 ‘C-on inkubáltuk. Az eredeti tenyészet fejlődésnek indult széleit „V-8” kereskedelmi márkajelű gyümölcslé agarba tettük, és 4 'C-on sötétben tartottuk. Nagyon hatásos spóraszaporulatot eredményező Phomopsis convolvulus tenyészetet hoztunk létre savanyú burgonya dextróz agaron (PDA), majd steril desztillált vízzel leöblítettük. A kapott spóraszuszpenziót PDA 1,2-t [12 g/1 burgonya dextróz tápközeg, 15 g/1 bakto agar, 100 mg/1 novobiocin és 100 ml/1 mezei szulák főzet (200 g friss mezei szulák levelet 11 vízben forraltunk 30-40 percig, leszűrtük, és 15 percen át autoklávban tartottuk)] tartalmazó petri csészékbe tettük. Ezeket aPDA 1,2 tenyészeteket 2-3 héten át, kiegészítő megvilágítás nélkül, laboratóriumi munkaasztalon, 21 'C-on inkubáltuk. A kapott lemezeket 10 ml vízzel felduzzasztottuk, és így milliliterenként (0,9-1,2) x 10 0 spórát kaptunk. A mezei szulák Phomopsis convolvulus IMI 312959tenyészettel való kezelése általában a következőkben ismertetésrekerülőeljárásszerinttörtént. A kezelendő növények mindegyikét átnedvesedésig bepermeteztük (4-6)xl06 spóra/ml Phomopsis convolvulus alfa-konidiát és 0,1 térfogati zselatint tartalmazó szuszpenzióval (a permetezést úgy végeztük, hogy a növények felületéről láthatóan összefüggő cseppek csurogjanak le). Az így beoltott növényeket 10 percen át a levegőn szárítottuk, majd 20 *C-os, nedves kamrába tettük, és ott tartottuk 24 órán át, ezután szaporító kamrákba tettük, ahol éjjel 20 *C-on, nappal 15 órán át 15361 lx megvilágítás mellett, 25 "C-on tartottuk. Avizsgáltnövényekmagoncait vagy hajtásait 2-4 leveles fejlődési állapotig hagytuk beoltva, kivéve, ha a leírásban egyéb oltási periódust jelzünk. A kontroll növényeket csak 0,1 tömeg% zselatintartalmú oldattal permeteztük be. 1. Példa Phomopsis convolvulus IMI 312959 spóratartalmú oltóanyag készítés Ebben a példában olyan ol tóanyag készítését mutatjuk be, amely mezei szulák gyomirtására alkalmas Phomopsis convolvulus IMI 312959 spórákat tartalmaz. A Phomopsis convolvulus spórákat savanyú burgonya dextróz agarban (a PDA) vagy „V-8” márka-4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
