202064. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyomirtásra, Phomopsis convolvulus gomba spóratenyészet alkalmazásával és a gombatenyészet előállítására
HU 202064B jelű agarban szaporítottunk 30-40 napon keresztül, 21 'C-on, laboratóriumi munkaasztalon, ezen időtartamon belül közeli ultraibolya fényű kiegészítő megvüágí tást alkalmaztunk egy héten keresztül. Ezután a gyorsan szaporodó lapos spóratenyészetekre 5 fecskendővel 10 ml steril, desztillált vizet tettünk, ahogyan a lapos felületet vízzel néhányszor átöblítettük a konidium állomány gyorsan összekeveredett a vízzel. A kapott konidium szuszpenziót PDA 1,2-t [12g/lburgonyadextróztápközeg, 100ml/lno- 10 vobiocin és 100 ml/1 mezei szulák főzet (200 g friss mezei szulák főzet (200 g friss mezei szulák leveleit 11 vízben forraltunk 30-40 percig, leszűrtük, és 15 percen át autoklávban tartottuk)] tartalmazó petri csészékbe tettük. A 9 cm átmérőjű petri csészékben 15 lévő agar felületére egyenként 0,4-0,5 ml konidium szuszpenziót csepegtettünk. Ezeket a csészéket ezután 21 'C-on vüágos vagy sötét helyen inkubáltuk 2-3 héten át. A csészéket egyenként leöblítettük 10 ml vízzel, és így (0,9-l,2)xl010 spóra/ml koncentrá- 20 ciójú szuszpenziót kaptunk. A petri csészékben lévő konidium életképességét parafilmmel való lezárással csökkentettük. Az életképesség a laboratóriumi körülmények közötti 3 hónapos tárolás után több mint 95% volt. A konidium szuszpenzió 10 tömeg% 25 szukróz oldatban, -70 'C-on, 9 hónapig tárolható úgy, hogy életképes marad. 2. Példa Ebben a példában az oltóanyag koncentráció be- 30 tegség kifejlődésére mutatott hatását ismertetjük. Friss Phomopsis convolvulus IMI 312959 konidiumot szuszpendáltunk 0,1 tömeg%-os zselatin oldatban, majd lxlO5, 5xl05, 5xl06 és lxlO7 spóra/ml koncentrációjú szuszpenziókat készítettünk 35 3. Példa A nedves kamra periódusidejének hatása a mezei szulák betegségének kifejlődésére 5 belőle. Mindegyik konidium szuszpenzióval beoltottunk egy-egy edényben lévő 3-5 leveles fejlődési állapotú magoncot. Mindegyik edényben 3 magonc volt. A kontroll magoncokat 0,1 tömeg% zselatin oldattal permeteztük be. A beoltott magoncokat 20 ‘C-os, nedves kamrába tettük 24 órára, ezután olyan szaporító kamrába tettük, amely éjjel 20 *C- os, nappal 25 'C-os hőmérsékletű volt, és a nappali megvilágítás 15 órán át 15361 lx volt. 15 nap múlva vizuálisan megvizsgáltuk a levélkárosodást, és meghatároztuk a pusztulás %-os értékét, valamint a száraz növénytömeget. A kísérletet még egyszer megismételtük. A kapott eredményeket az 1. táblázatban mutatjuk be. A táblázatban láthatjuk a mezei szulák károsodásának, illetve pusztulásának a spórakészítmény dózisától való függését. Ezen túlmenően azt is láthatjuk, hogy a készítmény 1,0x10° spórakoncentráció felett kiválóan alkalmas a mezei szulák kipusztítására. A Phomopsis convolvulus IMI 312959 spórákat tartalmazó készítménynyel beoltott mezei szulák károsodása és kipusztulása az 1. táblázatban láthatóan függ az alkalmazott dózistól. A mezei szulák visszaszorítása l,0xl0°/ml spórakoncentráció felett kiváló. A vizsgálati eredmények értékelésénél a következő statisztikai módszereket alkalmaztuk:- Friedman vizsgálat: több, mint két vizsgálat egyidejű statisztikai összehasonlítása;- Tukey W vizsgálat: középértékek páronkénti összehasonlítása. Ezeknek a módszereknek az ismertetése az alábbi irodalmi helyen található meg: Robert G. D. Steel and James H. Torrie; Principles and Procedures of Statistics: A biometrical Approach, 2 nd edition, McGraw-Hill Book Company 1980. USA. kamrában való tartózkodás ideje milyen hatással volt a mezei szulák betegségének kifejlődésére. 3-5 leveles fejlődési állapotú mezei szulák ma-6 1. táblázat Az oltóanyag koncentráció (spóra/ml) hatása a Phomopsis convolvulus IMI 312959 spórákkal beoltott mezei szulák betegségének kifejlődésére Oltóanyag (spóra/ml) Betegség mértéke1 Pusztulás (%) Száraz növénytömeg (g/edény) l.OxlO5 0,9 a2 0 0,47 d3 5,0xl05 2,0 ab 0 0,33 c 1,0x10*! 3,9 b 66,7 0,17b 5,0x10® 4,0 b 100,0 0,13 a l.OxlO7 4,0 b 100,0 0,11a 1. A betegség mértéke: 0- nincs látható tünet; 1- 25% károsodás; 2- 25-50% károsodás; 3- 51-75% károsodás; 4- 75% károsodás 2. Az oszlopon belüli azonos betűjelekkel ellátott középértékek a Friedman vizsgálat szerint P- 0,05 értéknél szignifikánsan nem különböznek. 3. Az oszlopon belüli azonos betűjelekkel ellátott középértékek a Tukey W vizsgálat szerint P- 0,05 értéknél szignifikánsan nem különböznek. Ebben a példában megvizsgáltuk, hogy a nedves goncokatbeoltottuk5xl06spóra/mlkoncentrációjú 4
