202063. lajstromszámú szabadalom • Nyújtott hatású biológiai peszticidet tartalmazó készítmény és eljárás a hatóanyag és a termelő sejtek előállítására
HU 202063B 17 18 4. biológiai vizsgálat — P. fluorescens Mikroorganizmus Kezelés Elpusztult lárvák száma/összes lárva Elpusztult lárvák %-a Élösejtszám/ml P. fluorescens l%lugol, 4 óra 0/20 0 0 P. fluorescens +Bacillus thüringiensis toxin l%lugol, 4 óra 18/20 90 0 jük [lásd King, E. O. és munkatársai: J. Lab. and Clin. Med. M. 304 (1954)]. A tápközeg a következő alkotórészeket tartalmazza: proteóz pepton, 3. számú, 2,0%; Bacto agar, 1,5%; glicerin, vegyileg tiszta, 1,0%; K2HPO4 (vízmentes), 0,15%; MgS04.7H20, 0,15%, pH= 7,2-re beállítva. A 33. törzs lényegében teljesen elpusztult 5 perc alatt, míg a pCH törzsnél 10 perc után nem mutatkozott élő sejt. A 33. törzs sejtjeit [nem kezelt, hővel kezelt, vagy lugollal kezelt (1 %-os lugol-jódoldat, 2 óra, szobahőmérséklet)] szuszpendáljuk 10 ml ionmentesített 15 vízben, hogy mintegy 10E9/ml sejtkoncentrációt kapjunk. A sej tszuszpenziót azután ultrahangos kezelésnek tesszük ki 5 percen át Bronson 200 Sonifier készüléken (10. mikroszondát, 50% impulzus kitöltési tényezőt és lüktető módot alkalmazva). A sejt- 20 szuszpenzió optikai sűrűségét (575 nm) mérjük az ultrahangos kezelés előtt és után. A csökkenés az optikai sűrűségben a sejt szétzúzódását jelzi. Az eredményeket az itt következő 5. táblázat adja meg. A pCH törzs sejtjeit (5.10E1 °/ml) hőkezeljük 70 °C hőmérsékletű vízfürdőben és toxieitásra megvizsgáljuk biológiai módszerrel T. ni lárvák ellen. A biológiai mérési folyamat újonnan kikelt káposztalepke hernyókat alkalmaz, amelyeket a biológiailag vizsgálandó anyagok cseppecskéit tartalmazópetri-25 csészébe helyezünk. A lárvákat hagyjuk, hogy magukba szívják a folyadékot, majd kis edényekbe visszük át ezeket, amelyek a lárvák étrendjét tartalmazzák. A lárvákat 6 nap után megvizsgáljuk és az elölt állatok teljes számát rögzítjük. 30 5. táblázat Ultrahangos kezelés—P. fluorescens 33. Kezelés Ultrahangos előkezelés Optikai sűrűség (575 nm) Ultrahangos utókezelés Élő 0,24 0,05 Lugol-oldat (1%, 2 óra, szobahőmérséklet) 0,20 0,19 Hőkezelés 70 ”C 1 0,22 0,06 3 0,21 0,07 5 0,22 0,09 15 0,20 0,10 30 0,21 0,11 60 0,19 0,13 90 0,22 0,13 10
