202063. lajstromszámú szabadalom • Nyújtott hatású biológiai peszticidet tartalmazó készítmény és eljárás a hatóanyag és a termelő sejtek előállítására

HU 202063B

haslábúak, vagy férgek, mint fonalférgek és laposférgek. A különböző érzékeny rovarok lehetnek bogarak, pillék, legyek, szöcskék, tetvek és százlábúak.

A gazdasejtben termelődő peszticid lehet aktív formában termelt polipeptid, de lehet prekurzor vagy elő-forma is, amely esetén a toxin-aktivitás kifejlesztéséhez pl. a kártevő is hozzájárul; üyen pl. a B. thüringiensis var. kurstaki kristályos toxin ja. így a gén kódol egy olyan enzimet, amely egy metabolitot peszticid kompozícióvá alakít át.

A természetben előforduló toxinok: aB. thüringiensis var. kurstaki kristályos polipeptid toxinjai, amelyek pikkelyesszárnyúak ellen aktivak; a B. thüringiensis var. israelensis toxinjai, amelyek szúnyogok ellen aktívak; a B. thüringiensis M-7 toxinjai, amelyek fedelesszámyúak dien aktívak; a B. thüringiensis var. aizawai toxinjai, amelyek spodopterák ellen aktívak; és a B. sphaericus toxinjai, amelyek szúnyoglárvák ellen aktívak. Más toxinok pl. a rovarpatogén gombák toxinjai, mint a Beauveria bassiana beauverin je és a Metarhizum alfaj destrixinjei, vagy a széles spektrumú inszekticid vegyületek, mint pl. a Streptomyces avermitilus avermectinjei. A fentieket példázzák a következő tenyészetek:- Bacillus thüringiensis var. kurstaki HD-1 — NRRL B-3792, amely a 4.448.885. lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban szerepel;

- Bacillus thüringiensis var. israelensis — ATCC 35646;-Bacillus thüringiensisM-7—NRRLB-15939;- Bacillus thüringiensis var. tenebrionis—DSM 2803.

AzalábbiB. thüringiensis tény észetek állnak rendelkezésre azEgycsült Államok Mezőgazdasági Minisztériumától (United States Department of Agriculture, USDA), Brownsville-ből, Texasból. Az igényeket a következő címre kell küldeni: Joe Garcia, USDA, ARS, Cotton Insects Research Unit, P.OJ3ox 1033, Brownsville, Texas 78520, USA.

B. thüringiensis HD 2 B. thüringiensis var. finitimus HD3 B. thüringiensis var. alesti HD4 B. thüringiensis var. kurstaki HD73 B. thüringiensis var. sotto HD770 B. thüringiensis var. dendrolimus HD7 B. thüringiensis var. kenyae HD5 B. thüringiensis var. galleriae HD29 B. thüringiensis var. canadensis HD224 B. thüringiensis var. entomoridus HD9 B. thüringiensis var. subtoxicusHD109 B. thüringiensis var. aizawai HD 11 B. thüringiensis var. morrisoni HD12 B. thüringiensis var. ostriniae HD501 B. thüringiensis var. tolworthi HD537 B. thüringiensis var. darmstadiensis HD146 B. thüringiensis var. toumanoffiHD201 B. thüringiensis var. kyushuensis HD541 B. thüringiensis var. thompsoni HD542 B. thüringiensis var. Pakistani HD395 B. thüringiensisvar. israelensisHD567 B. thüringiensis var. indiana HD551 B. thüringiensis var. dakota B. thüringiensis var. tohokuensis HD866 B. thüringiensis var. kumanotoensis HD867

3

B. thüringiensisvar. tochigiensisHD868 B. thüringiensis var. colmeri HD847 B. thüringiensis var. wuhanensis HD525 Egyéb toxin-termelő deponált törzsek:

Bacillus cereus ATCC 21281 Bacillus moritai ATCC 21282 Bacillus popilliae ATCC 14706 Bacillus lentimorbus ATCC 14707 Bacillus sphaericus ATCC 33203 Beauveria bassiana ATCC 9835 Metarhizum anisopliae ATCC 24398 Metarhizum flavovoridae ATCC 32969 Streptomyces avermitilus ATCC 31267 A toxinnak nem szükséges azonosnak lennie a természetben előforduló toxinnal. Apolipcptid toxinok lehetnek a természetben előforduló toxinok fragmensei; deléciós, transzverzics vagy tranziciós mutációk kifejeződési termékei, ahol az aminosavak kettő vagy kevesebb százaléka megváltozott lehet; vagy ismétlődő szekvenciák, amelyeket a célba vett kártevő gazdaszervezet képes feldolgozni. Ezen kívül fúziós termékeket is lehet előállítani, ahol egy, öt vagy több aminosavat lehet hozzátenni az N-terminálishoz, hogy pl. a toxin(ok) csökkentett proteolitikus lebomlását megakadályozzuk. Bizonyos esetekben azonos vagy különböző toxinok sokaságát lehet kódolni és kifejezni, ahol „processing” helyeket lehet bevezetni az egyes toxin-részek közé a politoxinban.

Bemutatásra alkalmas gazdasejtek lehetnek prokarióták vagy eukarióták, ezek normálisan olyan sejtekre korlátozódnak, amelyek nem termelnek magasabbrendű organizmusokra, pl. emlősökre toxikus anyagokat. Olyan organizmusokat is lehet azonban alkalmazni, amelyek magasabbrendű organizmusokra toxikus anyagokat termelnek, ha ez a toxin nem stabil, vagy az alkalmazás szintje megfelelően alacsony ahhoz, hogy elkerüljük a toxieitás bármiféle lehetőségét emlős gazdaszervezetre. Gazdaszervezetként különösen érdekesek lehetnek a prokarióták és alacsonyabbrendű eukarióták, pl. gombák. Prokariótákra, mind Gram-negatívokra, mind Gram-pozitívokra bemutatható példák: Enterobacteriaceae, mint az Escherichia, Erwinia, Shigella, Salmonella és Proteus; Bacillaceae; Rhizobiaccae, mint a Rhizobium; SpirUlaceae, mint a Photobacterium, Zymomonas, Serratia, Aeromonas, Vibrio, Dcsulfovibrio, Spirillum; Lactobacillaceae; Pseudomonadaceae, mint a Pseudomonas és Acetobacter; Azobacteraceac és Nitrobacteraceae. Az eukarióták közt vannak a gombák, mint a Phycomycclcs és Ascomycctes, amelyek magukban foglalják az élesztőket, mint a Saccharomyces és a Schizosaccharomyces; és a Basidiomycetes élesztők, mint a Rhodotorula, Aureobasidium, Sporobolomyces és hasonlók.

Egy gazdasejt kiválasztásában a következő jellemzőkre kell különös figyelemmel lenni a termelés céljaira: a heterológ gén könnyű bevezetése a gazdaszervezetbe, a kifejeződő rendszer hozzáférhetősége, a kifejeződés hatékonysága, a peszticid stabilitása a gazdaszervezetben és a kiegészítő genetikai képességek jelenléte. Peszticid mikrokapszulaként való felhasználásánál figyelembe kell venni a következőket: a peszticid számára védő tulajdonságok, pl.

4

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

3