201966. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hialuronsav-észterek és sóik, ezeket hatóanyagként vagy hordozóként tartalmazó gyógyszerkészítmények, valamint hialuronsav-észterekből képzett filmek és szálak előállítására
HU 201966 B 5. táblázat A HYAFF sorozatba tartozó vegyületek hatása a szaruréteg hidratáltságának fokára (minden érték 10 kezelés átlagának felel meg) 51 52 Termék x % első óra x % 3. óra x % 6. óra x %24. óra Placebo 41,5 28,3 13,4 2,2 Hialuronsav 54,7 37,6 19,7 5,3 HYAFF2 66,6 43,1 24,5 6,1 HYAFF7 93,5 66,7 30,1 11,4 HYAFFg 70,0 51,4 26,2 8,7 HYAFF? 81,0 59,9 29,0 9,6 HYAFF10 68,8 57,0 27,5 8,3 4. Enzim stabilitás és oxigénpermeabilitás vizsgálatok Anyagok A találmány szerinti új észterek előnyös tulajdonságait és előnyeiket a már ismert anyagokhoz képest a következő, enzim stabilitási és oxigén permeabilitási vizsgálatokkal is igazoltuk. A vizsgálatokat a következő vegyületek felhasználásával kialakított filmeken végeztük: HYAFF2 100%-ban metanollal észterezett hialuronsav HYAFF7 100%-ban izopropanollal észterezett hialuronsav HYAFF9 100%-ban n-propanollal észterezett hialuronsav HYAFF11100%-ban benzil-alkohollal észterezett hialuronsav HYAFF20100%-ban ß-fenil-etil-alkohollal észterezett hialuronsav HYAFF22100%-ban izopentil-alkohollal észterezett hialuronsav A filmeket a 39. példában ismertetett módszerrel alakítottuk ki. A HYAFF filmek enzimekkel szembeni stabilitása 20 A szérum észterázzal szembeni stabilitás Minden filmet (tömeg: kb. 20 mg) 5 ml nyúl szérummal együtt polietilén kapszulába helyeztünk, és konstans hőmérsékleten (37 °C) tartottunk. Megfigyeltük a film feloldódásához szükséges időt 25 (óra). A kapott eredmények a 6. táblázatban láthatók. A hialuronidázzal szembeni stabilitás Minden filmet (tömeg: kb. 20 mg) egy pH 5-ös 30 pufferrel (0,1 mól acetát, 0,15 mól NaCl) vagy pH 7,2-es pufferrel (0,1 mól foszfát, 0,15 mól NaCl) együtt polietilénkapszulába helyeztük, amely mlenként 100 E enzimet (here hialuronidáz, Miles Batch 8062, aktivitás: 342 turbidometriás egy- 35 ség/mg) tartalmazott. A tárolást konstans hőmérsékleten (37 °C) végeztük. Meghatároztuk a film feloldódásához szükséges időt (óra). A kapott eredményeket a 6. táblázat tartalmazza. 6. táblázat A HYAFF sorozatba tartozó származékokból kialakított filmek stabilitása szérum-észteráz (37 °C) és hialuronidáz (37 °C, pH 5 és pH 7,2) jelenlétében Vegyületek Stabilitás (óra) Szérum észteráz pH 5 Hialuronidáz pH 7,2 HYAFF2 72 120 120 HYAFF? 120 168 168 HYAFF7 90 150 150 HYAFF11 60 140 140 HYAFF20 130 180 180 HYAFF22 130 175 175 A HYAFF sorozatba tartozó filmek oxigénnel szembeni permeabilitása Minden filmet két, egymástól magával a memb- 60 r áimal elválasztott tartályba helyeztünk. Az egyik részt (térfogat: 1,2 cm3) részlegesen gázmentesített vízzel (PO2 = 6 kPa 23 4C-on), a másikba O2 és CO2 áramot vezettünk (95% illetve 5%), amit időben állandó értéken (1 buborék/másodperc) tartót- 65 tunk. Az egész rendszert nitrogén atmoszférában tartottuk. Meghatározott időközönként (15,30,60,90,120, 240 perc) kivettünk alikvot mennyiségű vizet (1,2 cm3), és meghatároztuk az O2 parciális nyomását Gas System analyser 1302 (Instrumentation Laboratories) műszerrel. A telítési nyomást (73 kPa) tekintettük referencia értéknek, és az előbb részle-27
