201966. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hialuronsav-észterek és sóik, ezeket hatóanyagként vagy hordozóként tartalmazó gyógyszerkészítmények, valamint hialuronsav-észterekből képzett filmek és szálak előállítására
HU 201966 B 45 46 2. táblázat A HYCL származékok (hialuronsav-észterek) gyulladásgátló hatása dextránnal kiváltott aszeptikus (exsudativ) phlogosis nyúl-szemben Kezelés 2 4 A phlogosis kezdetétől eltelt 6 8 10 napok 12 14 16 HIC7 (4) 0,0 0,0 0,0 25,0 50,0 100,0 100,0 100,0 vivőanyag (4) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 25,0 50,0 50,0 HYC8 (4) 0,0 0,0 0,0 25,0 50,0 100,0 100,0 100,0 vivőanyag (4) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 50,0 50,0 50,0 HYC9 (4) 0,0 0,0 0,0 25,0 25,0 50,0 100,0 100,0 vivőanyag (4) 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 50,0 50,0 100,0 Az értékeket százalékban fejezzük ki (a phlogosis jeleit nem mutató szemek száma a kezelt szemek számához viszonyítva). Zárójelben a kezelt szemek száma szerepel. 2. Abszorpciós és biológiai hozzáférhetőség vizsgálatok A találmány szerinti új termékek biológiai hatását úgy is vizsgáltuk, hogy megfigyeltük a hialuronsav bizonyos hidrokortizon származékainak biológiai hozzáférhetőségét. A felhasznált származékok a korábban HYC2, HYC5 és HYC8 jelzéseket kapott vegyületek voltak. Anyagok és módszerek Állatok A vizsgálatokhoz Charles River-Calco (Como)tól beszerzett, 250-350 g testtömegű hím Sprague- Dawley patkányokat használtunk, amelyeknek kívánság szerint vizet és pellet formában 4RF 21 jelzésű tápot adtunk, amelyet az „Italiana Mangimi” a Charles River licence alapján gyárt és forgalmaz. A hidrokortizont nátrium-hemiszukcinát formájában, általános intravénás úton 1,34 mg/kg dózisban (ami 1 mg/kg hidrokortizon bázisnak felel meg), és szubkután úton 2,68 mg/kg dózisban (ami 2 mg/kg hidrokortizon bázisnak felel meg) adagoltuk (az i.v. adagolással azokat a farmakokinetikai paramétereket szándékoztunk meghatározni, amelyek bármely más adagolási mód esetén tapasztalt abszorpcióhoz összehasonlítóként szolgálnak). A három HYC származékot szubkután úton 6,5 és 13 mg/kg dózisban (körülbelül 1 és 2 mg/kg hidrokortizon bázisnak felelnek meg) adagoltuk. A különböző anyagokat steril vizes konyhasó-oldatban oldottuk, kivéve a HYC5-öt, amelyet, miután tiszta vizes oldatban oldhatatlan, először az oldáshoz szükséges minimális mennyiségű dimetil-szulfoxid hozzáadásával szolubilizáltunk, majd só-oldattal a megfelelő térfogatra egészítettünk ki. Valamennyi vtgyületet 1 ml/kg konstans térfogatban, injekció formájában juttattunk az állatok szervezetébe. A plazma minták összegyűjtése A kezelés után szív-pungálással, antikoaguláns jelenlétében (nátrium-heparinát) minden egyes állattól 0,3 ml vért vettünk. A vérvételek ideje a következő volt: 15 perc, 30 perc, 60 perc, 120 perc, 180 perc, 300 perc, 360 perc, 420 perc, 480 perc, (*csak intravénás ada- 20 golás esetén). A hidrokortizon adagolása A hidrokortizont radioimmun-vizsgálat alapján adagoltuk (Cortisolo Kit, Biodata, Cod. 10394), jód 25 j elzést használva. A módszer pontossága, hat ismétlésben meghatározva (kettős) egy kontroll szérummal összehasonlítva 3,03%-nak, illetve 0,021%-nak mutatkozott. A módszer linearitása 1 és 1000 ng/ml között van. A megfigyelési határ 1 ng/ml. 30 A patkányokban a cortisolemia dózisát nem befolyásolja se ennek a hormonnak az alapszintje, se annak cirkuláris ritmusa, miután patkányban az endogén glikokortikoid hormonok metabolizmusa kortikoszteron és nem kortizol keletkezéséhez ve- 35 zet (lásd E. L. Green, Biology of the laboratory mouse). Az előzetes vizsgálatok azt mutatták, hogy a dózis módszer csak a szabad kortizolra jellemző. Az anticortisol ellenanyag nem áll semmiféle verseny- 40 ben a három HYC származékkal. Eredmények A 3. táblázatban a hidrokortizon átlagos plazma szintjeinek eredményeit tüntetjük fel, i.v. és s.c. 45 injekciós adagolást követően (1 és 2 mg/kg). Hangsúlyozni kell, hogy s.c. injekció után a termék meglehetősen gyorsan felszívódik (Tmax a megfigyelés szerint körülbelül 30 perc, Cmax pedig ugyanaz, mint azonos dózisban i.v. adagolás esetén). A 4. 50 táblázatban a kortizol farmakokinetikai paramétereit adjuk meg, amelyeket a plazma csökkenés görbéből grafikusan számítottunk. A 3. táblázatban az átlagos cortisol szintek szerepelnek a három HYC származék 6,5 illetve 55 13 mg/kg dózisban történő szubkután adagolása után (a dózisok körülbelül 1, illetve 2 mg/kg hidrokortizon bázisnak felelnek meg). A4, táblázatban a cortisolhoz viszonyított farmakokinetikai paraméterek láthatók, amelyeket grafikusan számítottunk 60 a három HYC vegyület plazma abszorpciós görbéjéből, maradék módszerrel. Meg kell jegyezni, hogy a három hialuronsavszármazék által felszabadított hidrokortizon kinetikája nem lineáris, azaz nem mutatható ki közvet- 65 len összefüggés a dózis-függő paraméterek, így a 24
