201966. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hialuronsav-észterek és sóik, ezeket hatóanyagként vagy hordozóként tartalmazó gyógyszerkészítmények, valamint hialuronsav-észterekből képzett filmek és szálak előállítására
HU 201966 B (HY) kanamicin-sójának előállítása — a karboxilcsoportok 75%-a etanollal észterezett, 25%-a kamacinnel sóvá alakított formában van 146 mg kanamicin-szulfátot (1 mól-ekvivalens) 20 ml vízben szolubilizálunk. Az oldatot 2 ml OH* formában levő kvaterner ammónium gyantával (Dowex 1x8) töltött, termosztált oszlopon 5 °-on eluáljuk. A szulfát-mentes eluátumot 5 °C-ra termosztált tartályban gyűjtjük össze. 1.6 g HY-észtert (mt.: 120.000), amelyben a karboxücsoportok 75%-a etilészter-, 25%-a nátriumsó-formában van (1 mól-ekvivalens monomer egységnek felel meg a nem-észterezett karboxilcsoportokra számítva) 400 ml vízben szolubilizálunk. Az oldatot termosztált, 2mlH+ formában levő szulfon gyantával (Dowex 50x8) töltött oszlopon 20 °C-on eluáljuk. A nátrium-mentes eluátumot keverés közben a kanamicin bázis oldatában gyűjtjük össze. A kapott oldatot pillanatszerűen fagyasztjuk és fagyasztással szárítjuk. Kitermelés: 1,5 g. A B. subtilis ATCC 6633 törzsön, standard kanamicinnel összehasonlításban végzett mikrobiológiai meghatározás 7 tömeg% kanamicin bázist mutat, amely megfelel az elméletileg számított értéknek. 33. példa Az etanollal részlegesen észterezett hialuronsav (HY) pilocarpin-sójának előállítása — a karboxilcsoportokra 75%-a etanollal észterezett, 25%-a pilocarpinnal sóvá alakított formában van 245 mg pilocarpin-hidrokloridot (1 mól-ekvivalens) 20 ml vízben szolubilizálunk. Az oldatot 2 ml OH* formában levő kvaterner ammónium gyantával (Dowex 1x8) töltött, termosztált oszlopon 5 eC- on eluáljuk. A klorid-mentes eluátumot 5 °C-ra termosztált tartályban gyűjtjük össze. 1.6 g HY-észtert (mt..: 200.000), amelyben a karboxÚcsoportok 75%-a etilészter-, 25%-a nátriumsó formában van (1 mól-ekvivalens monomer egységnek felel meg a nem-észterezett karboxilcsoportolő’a számítva) 400 ml vízben szolubilizálunk. Az oldatot termosztált, 2 ml H + formában levő szulfon gyantával (Dowex 50 x 8) töltött oszlopon 20 °C-on eluáljuk. A nátrium-mentes eluátumot keverés közben geminicin bázis oldatában gyűjtjük össze. A kapott oldatot pillanatszerűen fagyasztjuk és fagyasztással szárítjuk. Kitermelés: 1,89 g. 34. példa Az n-propanollal részlegesen észterezett hialuronsav (HY) pilocarpin-sójának előállítása — a karboxilcsoportok 85%-a n-propanollal észterezett, 15%-a pilocarpinnal sóvá alakított formában van 245 mg pilocarpin-hidrokloridot 10 ml vízben szolubilizálunk. Az oldatot 2 ml OH* formában levő kvaterner ammónium gyantával (Dowex 1x8) töltött, termosztált oszlopon 5 °C-on eluáljuk. A klorid-mentes eluátumot 5 °C-ra termosztált tartályban gyűjtjük össze. 31 4.1 g HY-észtert (mt.: 120.000), amelyben a karboxücsoportok 85%-a propilészter, 15%-a nátriumsó formában van (1 mól-ekvivalens monomer egységnek felel meg a nem-észterezett karboxilcsoportokra számítva) 100 ml dimetil-szulfoxidban szolubilizálunk. Az oldatot termosztált, 2 ml N+ formában levő szulfongyantával (Dowex 50 x 8) töltött oszlopon 20 °C-on eluáljuk. Az eluátumot keverés közben a pilocarpin bázis oldatában gyűjtjük össze. A kapott oldatot 600 ml etil-acetáttal kezeljük. A csapadékot szűrjük és négyszer 200 ml etil-acetáttal mossuk, majd 24 órán át 30 °C-on vákuumban szárítjuk. 3,5 g din szerinti vegyületet kapunk. 35. példa A hialuronsav (HY) (részleges) kortizon-észterének (C21) előállítása—20% észterezett karboxilcsoport—80% sóvá alakított karboxilcsoport (Na) 12,4 g, 105.000 molekulatömegű, monomer egységre számítva 10 mól-ekvivalensnek megfelelő HY-tetrabutil-ammónium-sót 310 ml dimetil-szulfoxidban 25 °C-on szolubilizálunk, hozzáadunk 0,850 g (2 mól-ekvivalens) 21-bróm-4-pregnén- 17a-ol-3,ll,20-triont és a kapott oldatot 24 órán át 30 °C-on tartjuk. Hozzáadunk 100 ml vizet és 5 g nátrium-kloridot tartalmazó oldatot, és a kapott elegyet lassan, állandó keverés közben 2000 ml acetonba öntjük. A kivált csapadékot szűrjük, háromszor 100 ml 5:1 arányú aceton/víz eleggyel és háromszor acetonnal mossuk, végül 8 órán át 30 °C-on vákuumban szárítjuk. A terméket ezután feloldjuk 300 ml, 1% nátrium-kloridot tartalmazó vízben, és az oldatot lassan, állandó keverés közben 1500 ml acetonba öntjük. A kivált csapadékot szűrjük, és kétszer 100 ml 5:1 arányú aceton/víz eleggyel, háromszor 100 ml acetonnal mossuk, végül pedig 24 órán át 30 °C-on vákuumban szárítjuk. 4,5 g cím szerinti részleges kortizon-észtert kapunk. Az észtercsoportok mennyiségi meghatározását R. H. Cundliff és P. C. Markunas (Anal. Chem. 32, 1028-1030 /1961/) módszerével végeztük. 36. példa A hialuronsav (HY) (részleges) hidrokortizonészterének (C21) előállítása—20% észterezett karboxilcsoport — 80% sóvá alakított karboxilcsoport (Na) 6.2 g, 80.000 molekulatömegű monomer egységre számítva 20 mól-ekvivalensnek megfelelő HY- tetrabutil-ammónium-sót 310 ml dimetU-szulfoxidban 25 °C-on szolubilizálunk, hozzáadunk 0,850 g (2 mól-ekvivalens) 21-br0m-4-pregn6n-llß,17adiol-3,20-diont, és a kapott oldatot 24 órán át 30 #C- on tartjuk. Hozzáadunk 100 ml vizet és 5 g nátriumkloridot tartalmazó oldatot, és a kapott elegyet lassan, állandó keverés közben 2000 ml acetonba öntjük. A kivált csapadékot szűrjük, háromszor 100 ml 5:1 arányú aceton/víz eleggyel és háromszor acetonnal mossuk, végül 8 órán át 30 °C-on vákuumban szárítjuk. A terméket ezután feloldjuk 300 ml, 1% nátrium-kloridot tartalmazó vízben, és az oldatot lassan, állandó keverés közben 1500 ml acetonba öntjük. A 32 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 17
