201954. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyhatású nukleozidok előállítására
HU 201954B juk el, amelyek a reakció végbemenetele után eltávolíthatók. A találmány szerinti eljárásnál a megfelelő, (ül) általános képletű purinbázist vagy annak sóját vagy védett származékát 3’-dezoxi-timidinnel reagál tatjuk, például a megfelelő pentozil-transzferáló enzim jelenlétében. A kapott (I) általános képletű vegyületet foszfátvagy más észter-származékává, például foszforilezőszerrel, például POCl3-mal vagy a megfelelő észterező szerrel, így például savhalogeniddel vagy savanhidriddel való reagáltatással alakítjuk át. Az (I) általános képletű vegyületeket vagy azok észterszármazékait ismert módon alakítjuk sóvá, így például bázissal való reagáltatással. Az észter- vagy sószármazékokat hidrolízissel a bázisvegyületté alakíthatjuk. A következő példákkal a korlátozás szándéka nélkül részletesebben mutatjuk be a találmány szerinti eljárást. A „hatóanyag” megnevezés minden esetben az (I) általános képletű vegyületeket, azok sóit vagy egyéb származékait jelenti. 1. példa 6-N-Piperidino-purin-9-béta-2’,3’-didezoxi-ri bofuranozid 0,5 g (2,41 mmól) 6-N-piperidino-purint (Sigma Chemicals, St. Louis MO) 10 ml dimetil-szulfoxidban oldunk melegítés közben, majd szobahőmérsékletre lehűtjük és hozzáadunk 0,82 g (3,62 mmól) 3’-dezoxi-timidint (Howitz, J.P. és munkatársai, J. Org. Chem. 31» 205 /1966/), 30 ml 10 mmól-os kálium-foszfát pufferrel együtt (pH- 6,8), amely még 0,04% kálium-azidot is tartalmaz. 10.000 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 20.000 I.U. purin-nukleozid-foszforüázt (Krenitsky T A és munkatársai, Biochemistry, 2ű, 3615, 1981 és 4.381.444. sz. USA-beli szabadalmi leírás) 10 ml DEAE cellulózon (Whatman) adszorbeálunk, majd a kapott szuszpenziót 35 °C hőmérsékleten keverjük. 8 óra elteltével a reakciókeveréket szűrjük, a szűrletet egymás után kapcsolt oszlopokra adagoljuk. Az első oszlop töltete ÁGI X2-hidroxid gyanta (2,5x10 cm), a második oszlop töltete Amberlite XAD-2 gyanta (2,5x20 cm), majd a minták feladása után az oszlopokat a nagy térfogatmennyiségű vízzel átmossuk és a terméket metanollal eluáljuk. Az eluátumokból az oldószert eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot ldoroform/metanol- 9/1 arányú elegyben oldjuk, ismételten kromatografáljuk (szilikagél, 5x20 cm, kloroform/metanol= 9/1). A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, etanolban oldjuk, 0,22 (i-os szűrőn átszűrjük, az etanolt elpárologtatjuk és a terméket vízben oldjuk, majd liofilizáljuk. íly módon 0,265 g cím szerinti vegyületet nyerünk, 0,1 hidrátja formájában, amely 0,3 etanolt is tartalmaz. Elemanalízis a Ci 5H21N5O2.0,3 C2H6O összegképletű vegyületre: számított: C:58,74, H: 7,27, N: 21,96%, mért: C: 58,86, H: 7,14, N: 21,82%. NMR:8,36(s, lH.Hg), 8,19 (s, 1H,H2),6,23 (dd, 1H,Hi), 5,01 (t, 1H, J-5,54, OHs), 4,12 (m, 3H, H4, OÍ2), 3,52 (m, 2H, H5), 2,37 (m, 2H, H2), 2,04 (m, 2H, H3), 1,61 (b, 2H, CH2). 7 2. példa 6-Klór-purin-9-béta-2’,3’-didezoxi-ribofurano zid A cím szerinti vegyidet előállítását az 1. példában leírtak szerint végezzük, azzal a különbséggel, hogy a 6-klór-purint (Sigma Chemicals, St. Louis MO) 5 ml dimetil-formamidban és 5 ml dimetoxi-etánban oldottuk. A szilárd anyag leszűrése után a szűrletet vákuumban 5 ml térfogatra betöményítettük és 100 ml vízben oldottuk. Ezt az anyagot XAD-2 töltetű, 2,5x20 cm méretű oszlopon kromatografáltuk, vízzel átmostuk és a terméket metanollal eluáltuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítettük, hozzáadtunk 20 ml vízmentes szüikagélt, az oldószert vákuumban eltávolítottuk és a szilikagélt egy szilikagél töltetű oszlopra adagoltuk, amelyet kloroform/metanol/ 9/1 eleggyel egyensúlyba hoztunk. A terméket tartalmazó frakciókat, amelyek dezoxi-timidint nem tartalmaznak, egyesítettük, az oldószert vákuumban eltávolítottuk, a maradékot etanolban oldottuk, szűrtük, majd vízben ismételten feloldottuk és liofilizáltuk. Ezt az anyagot ezután ismét kromatografáltuk (Polygosil Cl 8 gyanta, metanol/víz= 8/2), majd az oldószert vákuumban eltávolítottuk, a terméket vízben oldottuk és liofilizáltuk. íly módon 0,199 g cím szerinti vegyületet nyertünk, op.: 100 "C. Elemanalízis a C10H11CIN4O2 összegképletű vegyületre: számított: C:47,16, H: 22,00, N: 13,92%, mért: C: 47,10, H: 21,94, N: 13,86%. 3. példa 6-(EtU-amino)-purin-9-béta-2’,3’-didezoxi-rib ofuranozid 0,5 g (2,69 mmól) 6-(etü-amino)-purint (előállítása: a 6-klór-purin klóratomjának etil-amin aminocsoportjával való nukleofü helyettesítésével) és 0. 755 g (3,33 mmól) 3’-dezoxi-timidint (Horwitz, J. P. és munkatársai, J. Org. Chem., 31» 205 /1966/) 50 ml 10 mmólos kálium-foszfát pufferral elegyítünk (pH= 6,8, 0,04% kálium-azid), majd hozzáadunk 4001.U. tisztított timidin-foszforilázt és 700 1. U. purin-nukleozid-foszforilázt, majd a szuszpenziót 37 °C-on keverjük. 48 óra elteltével további 700 egység purin-nukleozid-foszforilázt és 400 egység timidin-foszforilázt adagolunk és a keverést 37 °C- on folytatjuk. 5 nap elteltével a reakciókeveréket szűrjük, a szűrletet AG-lX2-hidroxid gyanta töltetű oszlopra adagoljuk (2,5x10 cm), a terméket vízzel eluáljuk, majd Amberlite XAD-2 töltetű oszlopra adagoljuk. Az oszlopot ezután nagy mennyiségű vízzel átmossuk és metanolos eluálást végzünk. Az eluátumból az oldószert eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot vízben és acetonban oldjuk, majd liofilizáljuk. Ily módon 0,299 g cím szerinti vegyületet nyerünk, amely 0,2 vizet és 0,1 acetont tartalmaz, op.: 30 ”C, [a] 20°C - -29,45" (0,5 DMF). Elemanalízis a C12H17N5O2 . 0,2 H2O . 0,1 C3H6O összegképletű vegyületre: számított: C:54,17, H: 6,64, N: 25,68%, mért: C: 54,13, H: 6,69, N: 25,75%. 8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
