201954. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyhatású nukleozidok előállítására
HU 201954B 4. példa 6-(N-etil-N-metU-amino)-purin-9-béta-2’,3’-d idezoxi-ribofuranozid A 2. példában leírtak szerint járunk el. A reakciókeveréket szűrjük, a szűrletet Dowex-l-hidroxid oszlopra adagoljuk (2,5x10 cm), a terméket 90%-os metanol/víz eleggyel eluáljuk és Amberlite XAD-2 töltetű oszlopon (2,5x20 cm) kromatografáljuk, miután az oldószert eltávolítottuk (kb. 5 ml-re besűrítettük) és a maradékot 100 ml vízben feloldottuk. Miután a mintát feladtuk, az oszlopot nagy mennyiségű vízzel átmossuk és az eluálást 95% etanol/víz eleggyel végezzük. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, 20 ml szilikagélt adunk hozzá, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a szárított szilikagélt egy szüikagél töltetű oszlopra adagoljuk (4,8x20 cm) és kloroform/metanol- 98/2 eleggyel kiegyensúlyozzuk. A terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a visszamaradó anyagot etanolban oldjuk, majd szűrjük. Az oldószer eltávolítása után a maradékot vízben oldjuk, az oldatot liofilizáljuk, amikoris 0,3 g cím szerinti vegyületet nyerünk, amely 0,05 hidrát-tartalmú, op.: °C. Elemanalízis a C13H19N5O2.0,05 H2O összegképletűvegyületre: számított: C:56,12, H: 6,92, N: 25,17%, mért: C: 56,12, H: 6,94, N: 25,14%. NMR: 8,36 (s, lH.Hs), 8,19 (s, 1H.H2), 6,23 (dd, 1H, Hí), 5,05 (t, 1H, J-5,58, OH5), 4,09 (m, 1H, H4), 4,08 (m, 2H, CH2), 3,51 (m, 2H, Hs*). 3,33 (s, 3H, CH3), 2,41 (m, 2H, H2), 2,03 (m, 2H, H3), 1,14 (t, 3H, J-7.01.CH3). 5. példa 6-jód-purin-9-béta-2\3’-didezoxi-ribofuranoz id 0,634 g (2,54 mmól) 6-jód-purint (Sigma Chemicals, St. Louis MO) és 0,71 g (3,13 mmól) 3’-dezoxitimidint (Horwitz, J. P. és munkatársa, J. Org. Chem., 31,205 /1966/) elkeverünk 700 ml 10 millimólos kálium-foszfáttal (pH*. 6,8, 0,04% káliumazid), hozzáadunk 20001.U. tisztított timidin-foszforüázt és 70001.U. nukleozid-foszforilázt, a kapott szuszpenziót 35 °C hőmérsékleten keverjük, 48 óra elteltével szűrjük és a szűrletet vákuumban betöményítjük. A visszamaradó anyagot 95%-os etanol/víz elegyben oldjuk, majd hozzáadunk 20 ml szilikagélt és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A szárított szilikagélt szilikagél töltetű oszlopra adagoljuk (2,8x50 cm), az eluálást kloroform/metanol- 95/5 eleggyel végezzük, a terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a visszamaradó anyagot etanolban oldjuk, majd 0,22 p,-os szűrőn átszűrjük. Ezután az etanolt eltávolítjuk, hozzáadunk kb. 25 ml vizet és az anyagot * liofilizáljuk. fly módon 0,088 g cím szerinti vegyületet nyerünk, 0,2 hidrát-tartalom mellett, op.: 151 — 153 *CElemanalízis a C10H11N4O2.0,2 H2O összegképletű vegyületre: számított: C35.15, H:3,46, N: 15,77%, mért: C 35.31,H: 3.3 l.N: 15,83%. 6. példa 9 6-(N-ciklopropü-N-metü)-amino-purin-9-béta-2\3’-didezoxi-ribofuranozid 0,5 g (2,64 mmól) 6-(N-ciklopropil-N-metü-amino-purint (előállítása: 6-klór-purinból, amelynek klóratomját nukleofü helyettesítéssel ciklopropümetil-amin aminocsoportjával helyettesítettük) 5 ml dimetü-formamidban oldunk, lehűtjük szobahőmérsékletre, hozzáadunk 0,9 g (3,98 mmól) 3 ’-dezoxi-timidint (Horwitz, J.P. és munkatársai, J. Org. Chem, 11,205 /1966/) és 30 ml 10 mmólos káliumfoszfátot (pH- 6,8; 0,04%- kálium-oxid), 10.000 I.U. tisztított timidin-foszforilázt és 20.0001.U. purin-nukleozid-foszforüázt, 10 ml DEAE cellulózon (Whatman) abszorbeáltatjuk, majd a szuszpenziót 35 °C-on keverjük. 8 óra elteltével a reakciókeveréket szűrjük, a szűrletet egymás után kapcsolt oszlopokra adagoljuk. Az első oszlop töltete AGI-X2 gyanta (OH-forma, 2,5x10 cm), a második oszlop töltete Amberlite XAD-2 gyanta, mérete: 2,5x20 cm. A minta feladása után az oszlopokat 500 ml vízzel átmossuk és a terméket metanollal eluáljuk. A terméket ezután szüikagél töltetű oszlopon flashkromatográfiával tisztítjuk (5x20 cm, kloroform/metanol- 9/1), az oldószert vákuumban eltávolítjuk és a gumiszerű terméket acetonban oldjuk. Liofilizálás után 0,588 g cím szerinti vegyületet nyerünk, amely0,15 vizet és0,15acetont tartalmaz. Elemanalízis a C14H19N5O2. 0,15 H2O . 0,15 C3H6O összegképletű vegyületre: számított: C: 57,71, H: 6,77, N: 23,29%, mért: C: 57,73. H: 6,94, N: 23,39%. 7. példa 6-(Izopropü-amino)-purin-9-béta-2\3’-didezo xi-ribofuranozid A cím szerinti vegyület előállítását az 1. példában leírtak szerint végezzük azzal az eltéréssel, hogy 6- izopropil-amino-purint (előállítása: 6-klór-purinból és izopropil-aminból) 5 ml dimetü-formamidban és dimetü-szulfoxidban oldunk. Liofilizálás után 0,502 g cím szerinti vegyületet nyerünk, amely 0,2hidrátot tartalmaz, op.: 55-57 'C. Elemanalízis a C13H19N5O2.0,2 H2O összegképletű vegyületre: számított: C: 55,58, H: 6,96, N: 24,93%, mért: C: 55,54, H: 6,96, N: 25,01%. 8. példa Tiamiprin-9-béta-2’,3’-didezoxi-ribofuranozid 0,5 g tiamiprint (Burroughs Wellcome Co., Research Triangle Park NC) 2,5 ml dimetü-szulfoxidban és 15 ml dimetoxi-etánban oldunk, hozzáadunk 0,8 g 3 ’-dezoxi-timidint (Horwitz J. P. és munkatársai J. Org. Chem., 31,205/1966/) és 30 ml kálium-foszfátot (pH- 6,8). Ezután 1600 I.U. tisztított timidinfoszforilázt és 70.0001.U. purin-nukleozid-foszforilázt adagolunk hozzá és a szuszpenziót 35 °C hőmérsékleten keverjük. 96 óra elteltével a reakciókeveréket szűrjük, vákuumban szirup sűrűségűre töményítjük, hozzáadunk 25 ml vizet és az oldatot 1 éjszakán át 3 °C hőmérsékleten tartjuk A kiváló csapadékot szűrjük, 5 ml dimetü-formamidban szuszpendál juk, szűrjük, és a szűrlethez 15 ml metanolt adagolunk és az oldatot -20 ‘C hőmérsékleten 10 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
