201953. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új nukleozidszármazékok és azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
HU 201953 B 31 32 ként intravénásán 5 mg/testtömeg kg AZT-nel kezeltük. Ez idő alatt a vérlemezkeszám 140000/mm3- re emelkedett. Ezután a kezelést négy héten át 5 mg/testtömeg kg dózisú AZT négy óránkénti orális adagolásával folytattuk, majd négy héten át szüneteltettük a kezelést. A vérlemezkeszám két hét után 93000/mm3-re, négy hét elteltével 70000/mm-re csökkent. A kezelést 5 héten át 5 mg/testtömeg kg AZT négy óránkénti orális adagolásával folytatva a vérlemezkeszám 194000/mm3-re növekedett. A dózisnak 2,5 mg/testtömeg kg négy óránkénti orális adagolásra való csökkentése esetén a vérlemezkeszámban enyhe csökkenés észlelhető, de a vérlemezkeszám nem csökkent a trombocitopénia purpura diagnosztizálhatóságának szintjéig. 10 15 2. Vizsgálati példa Kaposi szarkóma kezelése 3’-Azido-3’-dezoxitimidinnel (AZT) A vizsgálatban 9 olyan beteget kezeltünk AZT- 20 nel, akik Kaposi szarkómában (KS) szenvedtek, majd megfigyeltük a kezelés eredményét. Egy betegnél teljes gyógyulást értünk el. Három betegnél csökkent a bőrelváltozás mértéke. Két beteg állapota változatlan maradt. 25 Három betegnél a bőrelváltozás mértéke tovább növekedett. Az ~ 50%-os válaszreakció összehasonlítható a KS kezelésére általában előnyös terápiaként elfogadott rekombináns a-interferon kezelésével. 30 3. Vizsgálati példa 3’-Azido-nukleozidok in vitro anti-HIV aktivitásának vizsgálata A 3’-azido-nukleozidok (gyógyszerek) aktivitá- 35 sát két sejtvonalra vizsgáltuk. H9 sejtvonalra (OKT4+ T-sejtvonal, amely a HÍV replikációt megengedi, de a HÍV sejtkárosító hatásával szemben részlegesen rezisztens) és TM3 sejtvonalra (T- sejt klón, tetanusz-toxoidra specifikus, letálisan be- 40 sugárzott HTLV-I-vel szemben immunizált és a gyors szaporodás és HÍV sejtkárosító hatására való érzékenység alapján szelektált. A gátlás-vizsgálatot a kövtkező módon végezzük: TM3 sejteket stimulálunk antigénnel és emel- 45 lett besugárzással (4000 rád; 40 Gy) kezelt friss autológ perifériás vér egymagvú sejtekkel (PBM), és a sejteket a vizsgálatot megelőzően 15 térfogat% interleukin 2-t (IL-2, lektin-hiányos; Cellular Products, Buffals, NY) tartalmazó komplett tápon 6 50 napig tenyésztjük. ATH8 sejteket antigén stimulálás nélkül használunk. A cél T-sejteket (2x10s) először 30 percig 2 ^g/ml Polybrene hatásának tesszük ki, ezután pelletizáljuk, 45 percig HÍV hatásának tesszük ki és 2 ml friss tápközegben újra 55 szuszpendáljuk, majd tenyésztő-csövekben 37 °C hőmérsékleten 5% szén-choxidot tartalmazó nedvesített levegőben inkubáljuk. A kontroll sejteket a fentiekhez hasonlóan kezeljük, de nem tesszük ki a vírus hatásának. A sejteket folyamatosan IL-2 és a szer hatásának tesszük ki. Ha a vizsgálatban ATH8 sejteket alkalmazunk, a vírus minimális sejtkárosító dózisa 5 vírus részecske/sejt. A sejt kokultúra kísérletekben 5xl04 letálisan besugárzott (10.000 rád) HÍV RF-II-termelő H9 sejtet vagy nem fertőzött H9 sejtet adunk 2x10s cél T sejthez. Különböző időpontokban ahaemocytometerben, mikroszkóp alatt, tripán-kék színezék kizárásos eljárással megszámoljuk az összes élő sejtet. Eredményeinket a XIII. táblázatban ismertetjük. XIII. Táblázat Vegyidet 3’-azido-2’,3’-didezoxicitidin 3’-azido-5-bróm-2’,3’didezoxiuridin 3’-azido-5-bróm-2’,3’-didezoxieitidin (E)-3-[l-(3’-azido-2’,3’-didezoxi-ß-D-eritro-pentofur anozil)-l,2,3,4- -tetrahidro-2,4-dioxi-5- -pirimidinil]-2-propénsav 5. Vizsgálati példa 3’-Azido-nukleozidok in vitro antibakteriális hatása A XIV. táblázatban a 3’-azido-nukleozidok in vitro antibakteriális hatására vonatkozó eredményeinket mutatjuk be különböző baktériumfajokra vonatkozó minimális gátló koncentrációik (MIC) megadásával. Standard anyagként trimetoprimet (TMP) alkalmazunk, a tápközeg 7% Iizált lóvérrel kiegészített szenzitivitást vizsgáló Wellcotest teszt agar. Az alkalmazott vegyületek az 1-8. jelöléseknek megfelelően a következők: 1) 3’-azido-3’-dezoxi-4-tiotimidin 2) 3’-azido-3’-dezoxi-5,-0-acetil-4-tiotimidin 3) 3’-azido-3’-dezoxi-2-dezoxi-2-tiotimidin 4) 5’-acetil-3’-azido-3-benzoil-3’-dezoxitimidin 5) l-(5’-0-acetil-3’-azido-2’,3’-dezoxi-ß-D-eritro-pentofuranozil)-5-metil-4-(l,2,4-triazol-l-il)-2 (lH)-pirimidinon 6) l-(3’-azido-2’,3’-didezoxi-ß-D-eritro-pentofuranozil)-2-(benzil-oxo)-5-metil-4(lH)pirimidi non 7) 3’-azido-3’-dezoxi-2-metoxi-timidin 8) 3’-azido-4-bróm-2’,3’-didezoxiuridin ED5o((j.mól/l) 10 5 5 100 XIV. Táblázat Organizmus MIC (jig/ml) Vegyület Standard 7 8 E.coli 0,1 > 100 10 0,1 > 10 0,1 > 10 10 >100 Salmonella typhimurium 0,1 > 10 10 0,1 > > 100 10 10 100 0,5 17
