201930. lajstromszámú szabadalom • Eljárás azónia-spironortropanol-észterek és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
33 HU 201930 B 34 Megnevezés: MP 194 (troszpium-klorid) (MS: 428) Gyártási szám: 9045 Oldószer: Tyrode-oldat Fürdökoncentrációk: 1 x 10** M/ml fürdöoldat 3.16 x 10"* M/ml fürdóoldat 1 x 10*® M/ml fürdóoldat 1 x 10*7 M/ml fürdóoldat Alkalmazott térfogat: 50 jul/28 ml fürdóoldat 3.3.2. Referencia anyag (referencia antagonists) Megnevezés: ipratropium-bromid (Atrovent® ) (MS: 412,4) Oldószer: Tyrode-oldat Fürdökoncentrációk: 1 x 10*® M/ml fürdóoldat 3.16 x 10*® M/ml fürdóoldat 1 x 10*® M/ml fürdóoldat 1 x 10*7 M/ml fürdóoldat Alkalmazott térfogat: 50 ul/28 ml fürdóoldat 3.3.3. További anyagok (referencia hatóanyag ) 3.3.3.1. Megnevezés: acetil-ß-metil-kolin-k lórid 5 (Sigma, MS: 195,7) Oldószer: Tyrode-oldat Fürdökoncentrációk: 1 x 10*7 M/ml fürdóoldat 1 x 10*® M/ml fürdóoldat 10 1 x 10*s M/ml fürdóoldat 1 x 10-4 M/ml fürdóoldat 1 x 10*3 M/ml fürdóoldat 1 x 10*2 M/ml fürdőoldat 3,16 x 10'2 M/ml fürdóoldat 15 Alkalmazott térfogat: 50 pl/28 ml fürdóoldat, kumulativ 3.3.3.2. Tyrode-oldat mint tápoldat 20 Összetétel Cikkszám mmól/liter Törzsoldat ml tórzsoldat/liter Tyrode-oldat NaCl 6404 139,2 58,00 g/1 (1 mólos) 139,2 ml KC1 4936 2,7 74,56 g/1 (1 mólos) 2,7 ml CaClzx2HzO 2382 1,8 147,00 g/1 (1 mólos) 1,8 ml MgChxőHzO 5833 0,245 99,62 g/1 (0,49 mól) 0,49 ml NaHCCh 6329 11,9 21,00 g/1 (0,25 mól) 47,6 ml NaH2P04xHz0 6346 0,4 4,00 g/1 (0,03 mól) 15,6 ml CgHuOs 8342 5,5-1,0 g Kétszer desztillált viz 1000 ml-re Valamennyi használt anyagot a Merck, Darmstadt cégtói szereztük be. A megadott cikkszámok a Merck-Katalógus rendelési számainak felelnek meg. A kalcium-klorid higroszkópos, ezért a törzsoldatot meg kell titrálni (Marius-Chlor-o-Counter, Kipp u. Zonen cég, 6242 Schönberg/Taunus). A különböző törzsoldatok összekeverésekor ügyelni kell arra, hogy a kalcium a hidrogénkarbonáttal és a foszfáttal kiválik ha az oldatokat nagy koncentrációban keverjük össze. Ezt elkerülhetjük, ha az 1,8 ml CaCh-tőrzsoldatot először körülbelül 100 ml kétszer desztillált vízzel higitjuk, a többi törzsoldatot mérólombikban kétszer desztillált vízzel alaposan felhígítjuk és a kalcium-oldatot csak ezután adjuk az oldathoz. 3.4. Csoportosítás 3.4.1. Beosztás a csoportokba: találomra 3.4.2. A vizsgált anyagcsoport készítményeinek száma: n = 4 (1 x 10*» M) n = 2 (3,16 x 10*® M) n = 2 (1 x 10*« M) n = 4 (1 x 10*® M) A referencia anyagcsoporté: n = 4 (1 x 10*® M) n = 2 (3,16 x 10*® M) n = 2 (1 x 10*® M) n = 4 (1 x 10*7 M) 45 3.5. A kísérlet végrehajtása A tengerimalacokat a nyakukra mért ütéssel narkotizáljuk. Ezután az egész légcsövet, a gégétől a légcső kettéégazódásáig durván kipreparáljuk, elkülönítjük és temperált (37 °C-os) és karbogénnel'"kezelt Tyrode-oldatba tesszük. Miután a légcsövet körülvevő kötőszövetet lehetőleg alaposan eltá^ volitottuk, a preparátumot finom ollóval körülbelül 45°-os szögben spirálosán felvágjuk és két egyenlő nagyságú darabra vágjuk. Mérés után a két preparátumot proximálisan és disztálisan selyemfonallal látjuk el. Az egyikkel a preparátumot egy hurokkal a fürdőedény fenekéhez rögzítjük, a másikat kis kampóval a fürdöedény felett a transzduktorhoz kötjük. Ezután a preparátumokat a kalibrálásnak megfelelően körülbelül 80 mN-al előre 19
