201925. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,4-dihidro-piridin-származékok és hatóanyagként e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására
43 HU 201925 B 44 5,12 (s, 1H); 6,14 (br s, 1H); 6,48 (t, 1H); 6,83 (m, 2H); 7,08 (m, 2H); 8,30 (d, 2H). jjj 1H-NMR (CDCh) é; 1,70 {m, 6H); 2,30 {s, 6H); 2,41 (t, 2H); 2,52 (s, 3H); 2,60-2,90 (m, 8H); 3,60 (s, 3H); 3,92 (t, 2H); 5,51 (s, 1H); 6,70-7,30 (m, 9H). . Tömegspektrum m/e 549,16 . (M* a C31H40N4OS összegképletre számitva 549,31). kkk 1H-NMR (CDCh) é: 1,50 (m, 6H); 2,29 (s, 3H); 2,35 (t, 2H); 2,47 (s, 3H); 2,67 (m, 4H); 3,09 (m, 4H); 3,59 (s, 3H); 3,94 (t, 2H); 5,59 (s, 1H); 6,79-7,34 (m, 8H). Tömegspektrum m/e 569,17 (M‘ a CmHmNíOs összegképletre számitva 569,25). Ill ‘H-NMR (CDCh) é: 1,35 (s, 9H); 2,25 (s, 3H); 2,46 (a, 3H); 2,68 (m, 4H); 3,13 (m, 6H); 3,87 (s, 3H); 4,60 (d, 2H); 5,49 (s, 1H); 5,83 (d, 2H); 5,93 (br s, 1H); 6,85--7,02 (m, 6H); 7,15 (t, 1H); 7,38 (d, 1H). Tömegspektrum m/e 591,43 (M* a C33H42N4O6 összegképletre számitva 591,32). mmm m-NMR (CDCh) é: 1,12 (d, 3H); 2,33 (s, 3H); 2,49 (s, 3H); 2,50 (m, 3H); 2,69 (m, 4H); 3,12 (m, 4H); 3,60 (s, 3H); 3,85 (s, 3H); 3,70-4,00 (m, 2H); 5,70 (2s, 1H); 6,30 (br s, 1H); 6,80-7,20 (m, 8H). Tömegspektrum m/e 551,08 (M* a C3oH38N40s összegképletre számítva 551,29). A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek mind kalcium2*-csatorna aktivir tással, előnyösen kalcium2*-agonista aktivitással, mind alfai-antagonista aktivitással rendelkeznek. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek farmakológiai tulajdonságainak vizsgálatát az alábbiak szerint végezzük. Alfai-adrenoceptorokhoz való affinitás meghatározása A [3H]-prazozin-kötödési vizsgálatot Timmermans, P.B.M.W.M., Schoop, A.M.C., és Van Zwieten, P.A. [Biochem, Pharmacol., 31, (1), 899-905, (1982)] módszere szerint végezzük. A reakcióelegy alfai-adrenoceptor-forrásként részlegesen tisztított patkányagy-membránt tartalmaz, és 0,2 nmól/1 koncentrációban [3H]-prazozint és adott esetben a vizsgálandó vegyületet tartalmazza friss pufferben. Az elegyet 60 percen keresztül 25 °C-on inkubáljuk, majd a reakciót üvegszálas szűrön való gyors szűréssel leállítjuk. A szűrön fennmaradó, receptorhoz kötött [3H]-prazozin mennyiségét szintillációs számlálóval határozzuk meg. A vizsgálandó ve- 24 gyületek alfai-adrenoceptor affinitásának mértékeként az IC50 inhibitor-koncentrációt tekintjük, amely a lehetséges helyettesitó azon koncentrációját jelenti, amely a specifikusan kötött [3H]-prazozin 50%-os kiszorításához szükséges. Kalcium-csatorna affinitás meghatározása A [3H]-nitrendipin kötődési vizsgálatot Böiger G. T. és munkatársai [Biochem. Biophys. Res. Comm., 104, (1) 1604-1609 (1982)1 módszere szerint végezzük. A reakcióelegy Ca2*-csatorna forrásként patkánysziv-mikroszómákat tartalmaz, és 0,5 nmól/1 [3H]-nitrendipint, valamint a lehetséges nitrendipin-helyettesitöt friss pufferben. A reakcióelegyet . 60 percen keresztül 25 °C-on inkubáljuk, majd a reakciót üvegszálszűrőn való gyors szűréssel leállítjuk. A membránhoz kötött [3H]-nitrendipin mennyiségét - amely a szűrőn fennmaradt - szintillációs számlálóval mérjük. A kalcium-csatorna affinitás mértékeként az IC50 inhibitor-koncentrációt tekintjük, ami a vizsgálandó vegyület azon koncentrációját jelenti, amely a specifikusan kötött [3Hl-nitrendipin 50%-os kiszorításához szükséges. A fenti két in vitro vizsgálatban kapott eredményeket a III. táblázatban foglaljuk össze. III. táblázat: A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek kalcium-csatorna és alfai-adrenoreceptor affinitása ■ [3H]-Nitrendipin [3H]-Prazozin Példa kötődés kötődés száma ICso (mól/1) ICso (mól/1) 1. 1.4 X 10-7 9,6 X 10-7 2. 2,9 X 10-8 8,0 X 10-7 5. 7,3 X JO 1 0 1—4 4,9 X 10-7 13. 8,3 X 10-7 >10-5 56. 3,0 X 10-’ 3,0 X io-7 57. 9,9 X 10-7 9,7 X io-7 58. 8,5 X io-7 1,3 X io-7 59. 2,9 X 10-7 1,3 X io-7 60. 1,0 X 10-« 4,9 X 10-« 61. 6,7 X O 1 09 1,1 X 10-6 68. 1,6 X IO*5 5,9 X io-7 69. 4,6 X IO“6 3,5 X io-7 87. 2,9 X 10-e 4,8 X io-« 88. 4,8 X 10-« 2,6 X 10-7 89. 4,0 X 10-6 7,1 X 10-« 104. 2,0 X IO*1 8,6 X 10-« 105. 2,2 X 10-7 1,8 X io-7 106. 2,5 X 10-7 1,4 X 10-7 107. 4,1 X 10-6 4,1 X io-7 108. 9,9 X 10-7 1,2 X io-« 109. 7,9 X 10-7 ■ 6,1 X 10-7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
