201807. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biomasszamentes avoparcin antibiotikum előállítására
HU201807 B 3. példa A pH befolyása az avoparcinnak fermentlé szűrletéből montmorillonit-nátriumon végbemenő adszorpciójára (A fermentálást a 2. példában megadott irodalom szerint végeztük) Az avoparcingyártási fermentlé egy részletét 2 tömeg/térf.% Dicalite 478 szűrési segédanyaggal kezeljük, és a pH értékét 98%-os kénsav lassú hozzáadásval 2,1-re állítjuk. A savanyított keveréket előbevonatos vákuumszűrőn szűrjük, s így - a HPLC mérés szerint - 21,1 g/liter avoparcint tartalmazó savas szűrletet kapunk. Ezt a szűrletet250ml térfogatú alikvot részekben egyenként 20 g montmorillonit-nátrium adszorbenssel (Fulbent 570, Lapor te Earths Ltd.) kezeljük. A szuszpenzió pH-értékét keverés közben 98%-os kénsav vagy szilárd nátrium-hidrogén-karbonát hozzáadásával állítjuk be. Az elegyct 30 percig környezeti hőmérsékleten keverjük, majd a szuszpenziókat szűrjük, és avoparcintartalmukat a szűrletben HPLC méréssel meghatározzuk. E kísérleteink eredményeit a III. táblázatban összegezzük. III. táblázat 7 pH értéke a kezelés során A fermentlé szűrletéből adszorbeált avoparcin % 1,9 69,1 2,8 67,7 3,8 64,4 4,9 64,8 5,8 60,4 6,9 38,8 7,6 10,8 4. példa Biomasszamentes avoparcin közbenső tennék előállítása fermentlé szűrletében végzett adszorpcióval (A fermentálást a 2. példánál megadottak szerint végeztük) Avoparvingyártásból származó fermentlé egy részletét 2 tömeg/térfy Dicalite 478 szűrési segédanyaggal kezeljük, és a pH értékét 98%-os kénsavval 2,1-re állítjuk. A savanyított fermentlevet előbevonatos vákuumszűrőn szűrjük, s így savas fermentlészűrletet kapunk. A HPLC mérés szerint a szűrlet 17,48 g/liter avoparcint tartalmaz. A szűrletből 5 litert 2,0 pH-értéken 150 g Celkate-T-21-vel kezelünk, a szuszpenziót szűrjük, és a szűrőkalácsot 450 ml vízzel 2,0 pH érték mellett mossuk. Az 5,3 liter térfogatú szűrlet avoparcintartalma a HPLC mérés szerint 16,36 g/liter. 5,25 liter szűrlethez 650 g természetes eredetű montmorillonit-kacliumot (Surrey powder, Laporte Earths Ltd.) adunk. Ekkor a szuszpenzió pH értéke 3,3, ezt 98%-os kénsav hozzáadásával 2,0-ra csökkentjük. A szuszpenziót 15 percig keverjük, majd a hatóanyagot tartalmazó adszorbenst vákuumszűréssel elkülönítjük. Az „üres” szűrletet a HPLC mérés szerint 1,32 g/liter avoparcint tartalmaz. A nedves adszorbens szűrőkalácsot 2 liter vízben szuszpendáljuk, és apH értékét 36%-os vizes ammóniaoldathozzáadásával 10,8-ra állítjuk. Aszuszpenziót szűrjük, s így 2,155 liter elsődleges eluátumot kapunk, amelynek avoparcintartalma 27,24 g/liter. A szűrőkalácsot 1 liter vízben reszuszpendáljuk, és a pH értékét a fentiek szerint 10,8-ra állítjuk. Szűrés után 1,160 liter másodlagos eluátumot kapunk, amelynek avoparcintartalma 10,53 g/liter. Végül a szűrőkalácsot 0,5 liter vízben reszuszpendáljuk, és a pH értékét 10,8-ra állítjuk. Szűrés után 0,55 liter harmadlagoseluátumotkapunk, amelynek avoparcintartalma 5,42 g/liter. A három eluátumfrakciót egyesítjük, s így olyan oldatot kapunk, amelynek avoparcintartalma 19,31 g/liter, és összes szilárdanyagtartalma 45,55 g/liter. Ennek az eluátumnak egy részletét porlasztva szárítjuk, ehhez egy mini-porlasztószárítót alkalmazunk, amelynek bevezetési levcgőhőmérsékelte 200 °C, kivezetési levegőhőmérséklete 98 *C. Az így kapott termék avoparcintartalma a HPLC mérés szerint 40,4%. (Avoparcin jellemzői: [aj D - -95'280m p, (E1 ’S cm - 48,5 semleges oldatban). Afcnti eredmények alapján az eljárás egyes lépéseinek hatásfoka (hatékonysága) számítással a következő: % Fermentlészűrlet/Celkate-val kezelt szűrlet 99,2 Celkate-val kezelt szűrlet/avoparcinban 92,0 dús abszorbens Avoparcinban dús adszorbens/eluátum 93,5 Eluátum/porlasztva szárított termék 95,3 Teljes fermentlé savas szűrlet/száraz termék 81,3 5. példa Biomasszamentes avoparcin közbenső termék előállítása fermentlé szűrletében végzett adszorpcióval (A fermentálást a 2. példában megadott irodalom szerint végeztük) A fermentlé egy részletéből savas szűrletet állítunk elő a 4. példában leírtak szerint. A szűrlet a HPLC mérés szerint 17,47 g/liter avoparcint tartalmaz. A szűrletet 2,0 pH-értékcn (kénsav hozzáadása után) 25 g/liter Cclkatc-T-21-vel kezeljük és derítjük. Azígy kezelt szűrlet 16,31 g/literavoparcint tartalmaz. Ezután párhuzamosan háromféle módon dolgozunk, három különböző montmorUlonit alkalmazásával, ezek: A montmorillonit-nátrium (Brebent); B. természetes eredetű montmorillonit-kalcium (Surrey powder); C. savval aktivált montmorillonit-kalcium (Flumont 300C). A fenti montmorillonitokat a Laporte Earths Ltd. cég szállította. Valamennyi adszorbensből 216 g-ot - azaz 12 tömeg/térf.%-ot - adunk minden egyes 1800 ml térfogatú fermentlészűrlethcz, és a szuszpenzió pH-értékét S>8%-os kénsavval 2,0-re állítjuk. 15perc keverés 8 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
