201806. lajstromszámú szabadalom • Eljárás géntechnológiai uton módosított mikroorganizmusok által termelt tisztított növekedési hormon kinyerésére

HU 201806 B

17

18

2. Táblázat

Áramlási sebességek 10K molekulatömeg ultraszűréshez1

Körülmények

Sebesség egységnyi membránterületre

Sebesség 3 kazettánál (1,40 m2)

Ultraszűrési sebesség,

271/óra

amikor a visszamaradó

19,361/óra mz

anyag a lekoncentráltabb

Ultraszűrési sebesség,

361/óra

amikor a visszamaradó

25,831/óra m2

anyag a leghígabb

Visszacirkulálási sebesség,

2,251/perc

amikor a visszamaradó anyag

1/óra m2

a legkoncentráltabb

Visszacirkulálási sebesség,

1,51/perc

amikor a visszamaradó anyag

64,581/óra m2

a leghígabb

1236000 Pa bemenő nyomás és 168000 Pa ellennyomásnál

3. Táblázat

Áramlási sebességek a

diaszűréshez 3 mmól/literes NH4OH oldattal szemben

Körülmények

Sebesség egységnyi

Sebesség 3 kazettánál

membránterületre

(1,40 m2)

Ultraszűrési sebesség

361/óra

Visszacirkulálási sebesség

96,881/üram2

2,251/perc

120200 Pa bemenő nyomásnál és 134000 Pa ellennyomásnál

Mérési módszer: Abszorbancia 280 nm-nél (1* cm sejt)

A lépés kitermelése: 90%, Összesített kitermelés: 25%

Kimenő térfogat: a kiindulási sejtszuszpenzió térfogatának 0,84%-a

számított vizsgálat: 14,6 g bGH/liter Dúsítási tényező: 18,3

13. PÉLDA

Fagyasztva szárítás

A dialízis-lépésből származó visszamaradó anyagot és a mosófolyadékot (4,2 lite.r 39000 OD 14,6 g bGH/1 koncentrációnál) rétegesen fagyasztjuk egy magas üvegedényben. Az edényt laboratóriumi fagyasztva szárítóval kötjük össze 24-48 órára, amíg annak tartalma szárazra nem liofileződik. Az edény külső felületét szobahőmérsékletnek tesszük ki a szárítási ciklus folyamán. Kimutatható bGH veszteség nincs. A bGH-t (61,3 g) pelyhes, fehér porként nyerjük ki.

Mérési módszer: Abszorbancia a bemenő anyagból és oldási vizsgálat a száraz bGH-ból

A lépés kitermelése: 100%. Összesített kitermelés: 25%

Kimenő térfogat: a kiindulási sejtszuszpenzió térfogatának 25%-a

Számított vizsgálat: 100% keverék térfogat

Dúsítási tényező: 68

40

45

50

55

60

65

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás tisztított eukarióta növekedési hormon vagy analógja kinyerésére olyan transzformált baktériumsejtekből, amelyekben az eukarióta növekedési hormon analógja a hormont vagy analógját kódoló DNS szekvencia kifejeződésének segítségével termelődik, ahol az eljárás során

1. a bakteriumsejtek szuszpenziójában a sejtek vay sejt-fragmensek sejtfalát szétzúzzák lizátum előállítására;

2. a lizátumból a szemcséket és oldhatatlan anyagokat tartalmazó csapadékot elkülönítjük;

3. az elkülönített csapadék szuszpenzióját megfelelő pufferoldatban elkészítjük;

4. a szuszpenziót kezeljük a folyadék és a szilárd anyagok közti kontaktus elérésére;

5. a részben vagy teljesen kicsapott anyagot elkülönítjük a folyadék és a szilárd anyag közötti kontaktust biztosító szuszpenzióból;

6. az elkülönített csapadékot oldatba visszük megfelelő mennyiségű vizes oldattal és a pH-t 9,0 és 12,0 közötti értékre állítjuk;

7. az oldatba vitt hormont vagy analógját elkülönítjük más sejtkomponensektől; és

8. az oldott hormont vagy analógját tovább tisztítjuk és koncentráljuk,

azzal jellemezve, hogy az oldatba vitt hormont vagy analógját ultraszűréssel különítjük el más sejt-10