201804. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2-keto-L-gulonsav előállítására mikrobiológiai úton

HU 201804 B

17

18

4. táblázat folytatása

Kísérő baktérium

K591s

Pseudogluconobacter

saccharoketogenes

12-5

TH14-86

Pseudomonas trifolii

67.2

98.8

2122.6

IFO12056

(41.5%)

(61.1%)

(75.8%)

Pseudomonas maltophilia

71.9

79.8

135.3

IFO 12692

(44.4%)

(49,3%)

(83,7%)

Proteus inconstans

—

—

124,5

IFO 12930

(77.0%)

Citrobacter freundii

—

132.3

IFO13544

(81.8%)

Enterobacter cloacae

_-132.0

IFO 3320

(81.6%)

Erwiniaherbicola

71,8

111,6

129,1

IFO 12686

(44.4%)

(69.0%)

(79.8%)

Xanthomonas pisi-121.5

IFO 13556

(75.1%)

Flavobacterium meningosepticum-122.8

IFO 12535

(75.9%)

4. példa

Egy 2 literes Sakaguchi-lombikba 500 ml előtenyészközeget mértünk, mely 2,0% glükózt, 1,0% peptont, 1,0% szárított élesztőt, 2,0% kalcium-karbonátot és 0,01% Actocolt (habzásgátló, Takeda Chemical IndustriesLtd., Japán) tartalmaz, s melyet 120 ’C hőmérsékleten 20 percig sterilezőink.

Az 1. táblázat szerinti közegen tenyésztett Pseu- 40 dogluconobacter saccharoketogenes TH 14-86 törzs sejtjeit 10 ml sterU vízben szuszpendál juk, és az egészet a Sakaguchi-lombikban levő közegbe oltjuk, és 85 rázás/perc sebességgel rázzuk 28 'C hőmérsékleten 3 napig, így egy előtenyészetet állítunk elő. 45

Egy 2001-es fermentorba 1201 (pH-6,5) törzstenyészetet mérünk, mely 3,0% glükózt, 1,0% CSL-t,

0,5% szárított élesztőt, 0,05% nátrium-tioszulfátot,

0,1% vas-szulfátot, 2,0% kalcium-karbonátot és 0,03% Actcolt tartalmaz, s 125 "C hőmérsékleten 30 50

percig sterilezzük. Ebbe a fermentorba bevezetjük az előbbi előtenyészet 1,8 literét, majd a tenyésztést 120 fordulat/perces keveréssel, 1001/perc levegőztetéssel, 98.104 Pa túlnyomáson és 30 *C hőmérsékleten 3 napig folytatjuk, és így egy törzstenyészetet 55

állítunk elő.

Az 1. táblázat szerinti közegen 28 ‘C hőmérsékleten 2 napig tenyésztett Bacillus megaterium kísérő baktériumból egy kacsnyival beoltunk egy 2 literes Sakaguchi-lombikban levő 500 ml fenti összetételű 60 előtenyészeti közeget, és 85 rázás/perc sebességgel rázzuk 28 *C hőmérsékleten 2 napig, így egy előtenyészetet állítunk elő.

Egy 50 literes fermentorba 30 liter közeget töltünk, melynek összetétele a fenti előtenyészeti kö- 65

zeggel megegyezik, és 120 ’C hőmérsékleten 20 percig sterilezzük. A közegbe 500 ml kísérő baktérium törzset oltunk, és 120fordulat/perckeveréssel, 301iter/perc levegőztetéssel, 9.8.104 Pa túlnyomáson és 30 ’C hőmérsékleten 2 napig tenyésztvea kísérő baktérium törötenyészetét állítjuk elő.

Egy 2m3-es fermentorba 10001fermentációs közeget töltünk, mely 15,0% L-szorbózt (külön sterilezve), 5,0% kalcium-karbonátot, 2,0% CSL-t, 0,2% szárított élesztőt, 0,3% vas-szulfátot és 0,03% Actcolt tartalmaz, s 125 *C hőmérsékleten 30 percig sterilezzük.

A fenti fermentorba a Pseudogluconobacter saccharoketogenes TH14-86 törzs törzstenyészetének 110 literét, és a kísérő Bacillus megaterium törzs törzstenyészetének 10 literét vezetjük, és a tenyésztést 110 fordulat/perc keveréssel, 900 liter/perc levegőztetéssel, 4,9.104 Pa túlnyomáson és 30 *C hőmérsékleten foly tat juk. 4 napig való tenyésztés után a fermentlé 123,1 mg/ml 2-keto-L-gulonsavat tartalmaz. Átalakulási arány; 76,1 %.

9. példa

Egy 200 ml-es kúp alakú 20 ml, 8. példa szerinti előtenyészeti közeget mérünk, és autoklávban 120 °C hőmérsékleten 30 percig sterilezzük.

Az 1. táblázat szerinti közegen tenyésztett (28 *C, 4 nap) Pseudogluconobacter saccharoketogenes TH 14-86 törzs egy kacsnyi mennyiségével a fenti tápközeget beoltjuk, majd 30 *C hőmérsékleten rázás közben inkubáljuk2 napig. Akapott tenyészetet (20 ml) egy 1 literes kúp formájú lombikba visszük, mely 200 ml ugyanüyen tápközeget tartalmaz, és 30 "C

10